本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，微孔板預(yù)先包被人肽基脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶(PPI)特異性抗體，加入待測(cè)樣本與梯度標(biāo)準(zhǔn)品，樣本中的PPI抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌純化體系后加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體，形成穩(wěn)定免疫夾心復(fù)合物，底物顯色終止后檢測(cè)吸光度，吸光度值與樣本中PPI含量呈正相關(guān)，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量檢測(cè)。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人肽基脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶(PPI)ELISA試劑盒
英文名稱：PPI Elisa Kit
貨號(hào)：Y-E964
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最小檢出 3.7pg/mL
檢測(cè)范圍：21pg/mL ~ 840pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：樣本孵育 84min，酶標(biāo)記二抗 52min，避光顯色 22min，合計(jì) 2h38min
保存條件：試劑盒 2~8℃避光存放，底物液嚴(yán)禁光照直射，洗滌液結(jié)晶溫水化開(kāi)即可
顯色系統(tǒng)：雙組份 TMB 混合顯色體系，2mol/L 硫酸終止反應(yīng)
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm+630nm 雙波長(zhǎng)校正讀數(shù)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù) Logistic 擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，8 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)稀釋梯度
注意事項(xiàng)：細(xì)胞凋亡釋放大量 PPI，壞死上清樣本必須梯度稀釋；加樣防止孔間溢液串孔
試劑盒組成：
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測(cè)依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點(diǎn)
辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過(guò)程中防止污染和揮發(fā)
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒室溫復(fù)溫 30min，稀釋濃縮洗滌液，梯度稀釋 PPI 標(biāo)準(zhǔn)品，取用實(shí)驗(yàn)專用酶標(biāo)板條。
標(biāo)準(zhǔn)孔加入 50μL 梯度 PPI 標(biāo)準(zhǔn)液；樣本孔加 49μL 稀釋液 + 11μL 待測(cè)樣本；空白孔無(wú)加樣。
檢測(cè)孔加入酶標(biāo)記特異性抗 PPI 抗體 100μL，封板 37℃孵育 64min。
棄去孔內(nèi)液體，洗滌液浸泡每孔 35s 甩干，循環(huán)洗板 5 次，板條充分拍干殘留液體。
顯色 A、B 液各 50μL 混勻加入每孔，37℃避光顯色 17min。
加入終止液 50μL 混勻終止反應(yīng)。
酶標(biāo)儀 450nm 測(cè)定吸光度，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算 PPI 蛋白濃度。
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關(guān)鍵字： 人肽基脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶;PPI;ELISA試劑盒;
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