本試劑盒采用特異性抗原抗體夾心ELISA原理，固相酶標(biāo)板包被抗人VDR特異性抗體，待測樣本中的維生素D受體與固相抗體特異性結(jié)合，洗板去除游離雜質(zhì)后，加入酶標(biāo)記二抗形成完整免疫夾心復(fù)合物，經(jīng)充分反應(yīng)和洗滌后，加入顯色底物發(fā)生酶促顯色反應(yīng)，顯色強(qiáng)度與樣本VDR含量成正比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線分析實(shí)現(xiàn)定量檢測。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人維生素D受體(VD R)ELISA試劑盒
英文名稱：VD R ELISA Kit
貨號：Y-E2709
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：檢出下限 0.05ng/mL
檢測范圍：0.1～7.5ng/mL
反應(yīng)時間：封閉 25min，樣本孵育 88min，二抗 56min，顯色 16min
保存條件：包被板單獨(dú)密封 2～8℃，其余試劑統(tǒng)一冷藏避光
顯色系統(tǒng)：即用型單組分 TMB 顯色液
檢測波長：450nm+630nm 雙波長校正
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù) Logistic 擬合，強(qiáng)制空白孔歸零
注意事項(xiàng)：操作全程避免強(qiáng)光直射，受體蛋白易發(fā)生構(gòu)象改變
試劑盒組成：
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點(diǎn)
辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒室溫放置 30min，VDR 抗體包被板去除孔內(nèi)保存液，洗滌緩沖液洗板 2 次，拍干微孔。
設(shè)立空白孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)孔、細(xì)胞蛋白樣本孔；標(biāo)準(zhǔn)品孔加入 VDR 標(biāo)準(zhǔn)品 55μL，樣本孔加入稀釋蛋白裂解液 55μL，空白孔加稀釋緩沖液。
每孔加入 HRP 檢測抗體 55μL，覆膜封板，37℃孵育 65min。
棄去孔內(nèi)反應(yīng)液，洗滌液浸泡每孔 40s 棄液，洗板 5 次，倒置充分拍干微孔。
分別加入顯色 A、B 液各 50μL，遮光室溫顯色 13min。
加入終止液 50μL，輕微震蕩終止酶促反應(yīng)。
450nm 波長檢測吸光度，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算 VDR 表達(dá)量。
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關(guān)鍵字： 人維生素D受體;VD R;ELISA試劑盒;
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