本試劑盒基于雙夾心ELISA免疫檢測(cè)原理，酶標(biāo)板預(yù)先包被靶向人未磷酸化類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1的特異性抗體，待測(cè)樣本中的目標(biāo)蛋白與固相抗體特異性結(jié)合，孵育洗板后加入HRP標(biāo)記配對(duì)二抗形成三元免疫復(fù)合物，再次洗板后啟動(dòng)底物顯色，顯色深淺與目標(biāo)蛋白含量正相關(guān)，通過(guò)吸光度檢測(cè)和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合，完成該蛋白的定量檢測(cè)。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人未磷酸化類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1ELISA試劑盒
英文名稱：Non-Phosphorylated ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E2916
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢出 0.09ng/mL
檢測(cè)范圍：0.18～12ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：室溫孵育 72min，二抗 43min，避光顯色 19min
保存條件：整套試劑 2～8℃避光儲(chǔ)存，禁止冷凍結(jié)冰分層
顯色系統(tǒng)：A、B 液分開取用混合顯色
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm 為主，620nm 扣除背景干擾
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：六組梯度標(biāo)品，軟件自動(dòng)擬合非線性曲線
注意事項(xiàng)：樣本采集后低溫分裝凍存，磷酸化修飾蛋白會(huì)產(chǎn)生交叉干擾
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒全部試劑室溫回溫 30min，靶蛋白包被酶標(biāo)板去除孔內(nèi)保護(hù)液，洗滌液洗板 2 次，吸水紙拍干微孔。
設(shè)置空白對(duì)照孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、血清樣本孔；標(biāo)準(zhǔn)品孔加入未磷酸化 IGFBP-1 標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加入稀釋血清樣本 50μL，空白孔加稀釋緩沖液。
每孔加入 HRP 標(biāo)記檢測(cè)抗體 50μL，封板膜密封，37℃孵育 60min。
棄孔內(nèi)液體，洗板液加滿每孔靜置 35s 倒掉，重復(fù)洗板 5 次，倒置拍干。
依次加入顯色 A 液、B 液各 50μL，遮光室溫顯色 17min。
每孔加注終止液 50μL，輕搖混勻終止反應(yīng)。
450nm 測(cè) OD 吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算目標(biāo)蛋白濃度。
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關(guān)鍵字： 人未磷酸化類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1;ELISA試劑盒;
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