本試劑盒采用經(jīng)典雙抗體夾心ELISA技術(shù)原理，酶標板預(yù)先包被抗人CTLA-4/CD152特異性抗體，樣本中的靶抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗板去除未結(jié)合組分，加入辣根過氧化物酶標記二抗形成免疫復(fù)合物，洗除游離抗體后啟動底物顯色反應(yīng)，顯色強度與靶抗原含量成正比，通過標準曲線比對實現(xiàn)定量檢測。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA試劑盒
英文名稱：CTLA-4 ELISA Kit
貨號：Y-E2833
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢出 0.05ng/mL
檢測范圍：0.09～8.7ng/mL
反應(yīng)時間：封閉 35min，樣本孵育 94min，二抗 57min，顯色 16min
保存條件：試劑盒 2～8℃冷藏，試劑瓶禁止倒置漏液
顯色系統(tǒng)：HRP 催化雙組份 TMB 顯色
檢測波長：450nm 單波長讀數(shù)
標準曲線繪制：六組標品梯度，軟件自動生成標準曲線方程
注意事項：免疫細胞上清樣本需去除細胞沉淀，避免非特異性吸附
關(guān)鍵注意事項：
本試劑盒僅科研體外檢測，嚴禁臨床診斷使用。
全程避免試劑、板條強光直射，TMB 見光易失效。
移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。
孵育溫度嚴格控制 37℃，溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。
洗板必須充分，殘液會造成非特異性結(jié)合，背景偏高。
終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會漂移，結(jié)果失真。
終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。
實驗廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批次試劑盒組分不可混用。
試劑盒運輸全程 2～8℃冷鏈，嚴禁高溫暴曬。
實驗步驟如下：
試劑盒室溫回溫 30min，CTLA-4 捕獲抗體包被板棄孔內(nèi)保護液，洗滌液洗板 1 次，吸水紙拍干備用。
規(guī)劃孔位：空白孔、系列標準品孔、淋巴細胞裂解樣本孔；標準品孔加入梯度 CTLA-4 標準品 60μL，樣本孔加入稀釋裂解液 60μL，空白孔添加稀釋緩沖液。
每孔加入 HRP 標記檢測抗體 60μL，封板膜封閉，37℃濕盒孵育 71min。
掀開封板倒掉廢液，洗滌液浸泡每孔 40s 棄液，洗板 6 次，倒置拍干微孔水分。
配制顯色工作液每孔加 100μL，37℃避光顯色 14min。
每孔加注終止液 50μL，輕搖酶標板終止底物顯色。
450nm 讀取吸光度，擬合標準曲線計算 CTLA-4 蛋白含量。
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關(guān)鍵字： 人細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4;CTLA-4/CD152;ELISA試劑盒;
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