?產(chǎn)品名稱：鮑氏不動桿菌PCR檢測試劑盒

英文名稱：Acinetobacter baumanniiPCR

貨號：YS-P013774

分類：PCR檢測試劑盒

規(guī)格?：50T/盒

檢測原理：
靶標鮑氏不動桿菌 ompA 特異性外膜蛋白基因，引物僅與該菌核酸互補配對，無交叉擴增。

高溫變性解開 DNA 雙鏈，低溫引物結(jié)合模板，中溫酶促合成大量目標基因片段。

熒光定量實時讀取擴增信號，特異性熒光上升曲線判定樣本檢出鮑氏不動桿菌。
實驗流程：
（一）反應(yīng)體系配制（冰上操作，防酶失活與污染）

按 “水→緩沖液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 順序加樣（酶最后加，避免失活）。

輕輕渦旋混勻，短暫離心（3000rpm，10s），使液體沉至管底。

無熱蓋的 PCR 儀：加 1 滴礦物油覆蓋液面，防止蒸發(fā)。

（二）PCR 程序設(shè)置（標準 35 循環(huán)）

預(yù)變性：94℃，3-5min（徹底變性模板 DNA）。

循環(huán)階段（35 次）：

變性：94℃，30s（雙鏈解鏈）。

退火：55-65℃，30s（引物結(jié)合模板，按引物 Tm 值調(diào)整）。

延伸：72℃，1min/kb（Taq 酶合成新鏈，1kb 片段約 1min）。

終延伸：72℃，5-10min（確保片段完整延伸）。

保溫：4℃，∞（防止非特異性復(fù)性，短期保存）。

（三）產(chǎn)物檢測（瓊脂糖凝膠電泳）

制膠：1% 瓊脂糖凝膠（1g 瓊脂糖 + 100mL 1×TAE 緩沖液），加熱融化后加核酸染料，倒膠插梳，凝固 30min。

上樣：取 5μL PCR 產(chǎn)物 + 1μL 上樣緩沖液，點樣；同時加 DNA Marker（分子量對照）。

電泳：120V，20-30min，至溴酚藍遷移至凝膠 2/3 處。

成像：凝膠成像系統(tǒng)觀察條帶，目標片段位置與預(yù)期一致則為陽性。

四、參數(shù)優(yōu)化

退火溫度（Tm）：引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T)，退火溫度一般低于 Tm 值 5℃，溫度過高無條帶，過低非特異性條帶多。

Mg2?濃度：1.5-2.5mM，濃度過低酶活性低、產(chǎn)量少；過高非特異性擴增增加。

循環(huán)數(shù)：25-35 個循環(huán)，少于 25 個產(chǎn)物不足，多于 35 個易出現(xiàn)非特異性條帶。

延伸時間：按目標片段長度調(diào)整，≤1kb 用 1min，1-3kb 用 2-3min。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項：
分區(qū)操作：試劑配制、樣品處理、PCR擴增需在獨立區(qū)域進行，避免交叉污染

無菌操作：使用帶濾芯槍頭、一次性手套和專用工作服

試劑準備：所有試劑使用前需完全融化，震蕩混勻后短暫離心

避光保存：含熒光探針的試劑需避光保存和操作

防止污染：陽性對照操作需最后進行，實驗后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作臺