本試劑盒基于特異性PCR擴增技術(shù)，針對豬痢疾短螺旋體專屬基因序列設(shè)計引物探針，可精準檢測豬糞便、結(jié)腸黏膜組織、腸道分泌物樣本中的病原菌核酸。該菌是豬痢疾、黏液出血性下痢的核心致病菌，試劑盒靈敏度高，可實現(xiàn)早期無癥狀感染篩查，特異性強，可區(qū)分其他腸道短螺旋體。適用于規(guī)?；i場豬痢疾防控、臨床病例確診、引種檢疫及豬場腸道病原菌凈化工作。
產(chǎn)品名稱 | 豬痢疾短螺旋體PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P013950 |
英文名稱 | Brachyspira hyodisenteriaePCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
提取豬結(jié)腸黏膜細菌 DNA，qPCR 靶向短螺旋體毒力 tlyA 基因，熒光探針特異性檢出致病豬痢疾短螺旋體。
普通 PCR 擴增螺旋體 16S rRNA 特異性基因，電泳條帶陽性確診豬痢疾病原。
磁珠純化糞便微量細菌 DNA 后巢式 PCR，大幅降低糞便雜質(zhì)對擴增的抑制作用。
?操作步驟?：
1. DNA提取（樣本制備區(qū)）
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA，建議濃度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標準曲線制備（獨立操作區(qū)）
標記6管為梯度稀釋點（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽性對照依次稀釋，混勻后作為標準品（避免污染）。
3. PCR反應(yīng)體系配制（試劑配制區(qū)）
按以下比例配制（示例）：
| 組分 | 體積（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機檢測
程序設(shè)置：預(yù)變性95℃ 3 min；40循環(huán)（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)Ct值及標準曲線計算樣本濃度。
?注意事項?：
1、實驗分區(qū)管理?
實驗全程需嚴格劃分三個獨立區(qū)域：?試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)?，各區(qū)實驗服、移液器及耗材?嚴禁混用?，防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭，每步更換槍頭；
陽性對照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進行，避免污染其他試劑；
加樣后立即蓋緊管蓋，避免氣溶膠擴散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?，避免反復(fù)凍融，確保穩(wěn)定性；
使用前于冰上解凍并輕柔混勻，瞬時離心后使用。
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