細胞名稱：L6    大鼠成肌細胞

組織來源：骨胳肌；成肌細胞

培養(yǎng)條件：DMEM +10% FBS

形       態(tài)：貼壁；成肌細胞

背       景：該細胞是Yaffe在甲基膽蒽存在的情況下從大鼠大腿肌原代培養(yǎng)的zui初兩代細胞中分離得到的；在培養(yǎng)基中融合形成多核的肌管和橫紋肌纖維，細胞融合的程度隨著代數的增加而下降，因此細胞應低代次冷凍并周期性地重新克隆以選擇融合能力強的細胞。該細胞應在達匯合狀態(tài)前傳代，以延緩細胞分化能力的喪失，如果讓培養(yǎng)容器中的細胞長滿，這株細胞的成肌組分將迅速耗盡。

L6(大鼠成肌細胞)“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數／100個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好時期，稱指數增生期(對數生長期)，適宜進行各種試驗。

formazan結晶的生成量僅與活L6(大鼠成肌細胞)數目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。

1.接種：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個接種到96孔板，每孔體積200ul.

2.L6(大鼠成肌細胞)培養(yǎng)：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間）。

3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.

繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內培養(yǎng)上清液，對于懸浮需要離心后再吸棄孔內培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。

4.比色：選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制L6(大鼠成肌細胞)生長曲線。