EHA105 Electro感受態(tài)細胞
EHA105 Electroporation-Competent Cell 產品說明書
產品規(guī)格 （CAT#: LM1010）
EHA105 Elec： 50μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl ) 10μl
保存條件(保質期)： -80℃（12個月）
EHA105 Electro感受態(tài)細胞基因型
C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine
EHA105 Electro感受態(tài)細胞產品說明
EHA105菌株由EHA101菌株改造而來，為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型Ti質粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)，此質粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。EHA105菌株適用于水稻、煙草等植物的轉基因操作。唯地生物開發(fā)的EHA105電轉感受態(tài)特別適用于大質粒的轉化：經pCAMBIA2301質粒 (size:11633 bp)檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA；經pCAMBIA2301-ZH質粒（size:40 kd）檢測轉化效率可達5×103 cfu/μg DNA。
EHA105 Electro感受態(tài)細胞操作方法
1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化，加入0.01-1 μg質粒DNA（體積不大于6ul，感受態(tài)轉化效率較高，次使用前做預實驗確定所加質粒的量），用手撥打管底混勻，立即插入冰中，用200 μl槍頭將感受態(tài)-質?；旌衔锟焖僖频诫姄舯?，蓋上杯蓋，空管保留待用。
3. 啟動電轉儀，設置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數(shù)為Biorad 推薦，使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中，加入700 μl無抗生素的LB并轉移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
（當平板只含有50 μg/ml kan 時，28℃培養(yǎng)48 h即可；平板中同時加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 時，需28℃培養(yǎng)60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90 h）。
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