人成纖維細胞無血清培養(yǎng)基
產(chǎn)品基本信息
Applied CellTM人成纖維細胞無血清培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基450mL，添加劑50mL
基礎(chǔ)培養(yǎng)基2-8℃，添加劑-20--80℃
人真皮/肺/心臟等多種組織器官來源成纖維細胞培養(yǎng)
產(chǎn)品簡介
人成纖維細胞無血清培養(yǎng)基是埃澤思生物科技有限公司（Applied CellTM）自主研發(fā)的一款適用于人成纖維細胞培養(yǎng)的無動物源細胞培養(yǎng)產(chǎn)品。本產(chǎn)品應(yīng)用人真皮、肺、心臟等多種組織器官來源成纖維細胞原代分離、擴增與傳代培養(yǎng)，且不含動物血清，內(nèi)毒素水平低于藥典標準（<0.06EU/mL）。本產(chǎn)品生產(chǎn)過程遵循ISO9001體系,并符合GMP指導原則。
產(chǎn)品特性
產(chǎn)品內(nèi)容
相關(guān)產(chǎn)品
人真皮成纖維細胞（Applied CellTM: Cat. no.AC-2001005）
Serum-Free細胞凍存液（Applied CellTM: Cat. no.AC-1001005/AC-1001006）
人臍帶間充質(zhì)干細胞（Applied CellTM: Cat. no.AC-2001003）
人脂肪間充質(zhì)干細胞（Applied CellTM: Cat. no.AC-2001004）
操作方法
人成纖維細胞傳代培養(yǎng)：
人成纖維細胞培養(yǎng)基配制
1.2將添加劑以10%比例加入到人成纖維細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混勻，即為人成纖維細胞培養(yǎng)基（AC-1001015）?；旌虾笈囵B(yǎng)基可在2-8℃ 穩(wěn)定儲存2-3周，不建議使用已配制超過3周的培養(yǎng)基。
1.3人成纖維細胞培養(yǎng)基可直接應(yīng)用于人真皮、肺、心臟等多種組織器官來源的成纖維細胞的原代分離、擴增與傳代培養(yǎng)。
操作方法(以下步驟皆應(yīng)在無菌條件下操作)
人成纖維細胞復蘇(10cm dish)
2.1 從液氮或-80℃冰箱中取出凍存的人成纖維細胞，迅速放入37℃水浴快速融解。
2.2 在生物安全柜或超凈臺中，將解凍后的細胞懸液緩慢加入5 mL預溫的人成纖維細胞培養(yǎng)基（AC-1001015）。
2.3 1000rpm 離心3 min，吸掉上清，加入10ml人成纖維細胞培養(yǎng)基重懸細胞。
2.4 將細胞均勻鋪到培養(yǎng)皿中，水平十字振動培養(yǎng)皿使細胞均勻分布，5% CO2的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后觀察細胞狀態(tài)。
2.5 24h后更換新鮮人成纖維細胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每2-3天更換培養(yǎng)液。
人成纖維細胞傳代培養(yǎng)
1. 在顯微鏡下觀察細胞，當細胞融合度達到90%，即可傳代。
2. 在超凈臺/安全柜中，吸掉原有培養(yǎng)基，加入PBS溶液清洗一次，加入Xeno-Free細胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆蓋皿/瓶底。
3. 室溫孵育4-5分鐘或37℃孵育2-4分鐘，顯微鏡下觀察大部分細胞脫離皿底即停止消化。
4. 加入消化液2倍體積的人成纖維細胞培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細胞，并輕輕吹打混勻，使細胞完全分散。
5. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，1000 rpm離心3 min。
6. 棄上清，加入人成纖維細胞培養(yǎng)基，重懸細胞，計數(shù)。1：2-1：4比例傳代，或按2-5x104 cells/cm2 傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意：人成纖維增殖情況與細胞密度密切相關(guān)，所以傳代時細胞密度不宜過稀。
人成纖維細胞凍存
1. 細胞達到90%匯合度， 吸掉原有培養(yǎng)基，PBS清洗一次。
2. 加入Xeno-Free細胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆蓋皿/瓶底，室溫孵育4-5min或37℃孵育2-4min分鐘，顯微鏡下觀察大部分細胞脫離皿底即停止消化。
3. 加入消化液2倍體積的人成纖維細胞培養(yǎng)基，用移液槍輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細胞，并輕輕吹打混勻，使細胞完全分散。
4. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，1000 rpm離心3 min，吸掉上清。
5. 加入適量Serum-free細胞凍存液（AC-1001005/1001006），調(diào)整細胞凍存密度在1×106 cells/mL左右，每支凍存管分裝1.5-2ml。
6. 直接放入-80℃，24h后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。
質(zhì)量控制
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上海埃澤思生物科技有限公司（ Applied Cell?）專注于治療用及生產(chǎn)用細胞培養(yǎng)產(chǎn)品研發(fā)與生產(chǎn)，目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細胞、免疫細胞培養(yǎng)，凍存以及分離等領(lǐng)域。為保證產(chǎn)品標準化、一致性，我們對所有產(chǎn)品進行嚴格的原料篩選及生產(chǎn)控制。目前，我公司已通過ISO9001：2015質(zhì)量管理體系認證。除提供產(chǎn)品支持，本公司的技術(shù)團隊還可為您提供及時有效的技術(shù)支持、技術(shù)咨詢，以及與您探討感興趣的科學問題和解決方案。最終我們希望通過高品質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)，不斷推動細胞治療、再生醫(yī)學以及藥物發(fā)展與創(chuàng)新，愿我們早日成為您在研發(fā)科研及應(yīng)用領(lǐng)域的忠誠合作伙伴。
公司愿景:
我們努力成為中國細胞培養(yǎng)領(lǐng)域最頂尖產(chǎn)品與服務(wù)提供商。
公司使命: