"Capan-2細(xì)胞：人胰腺癌細(xì)胞

細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

Capan-2 Cell

細(xì)胞形態(tài)特性：多邊形

64439-81-2

很多朋友討論細(xì)胞培養(yǎng)問題，見到很多很好的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，這里說一些我個(gè)人的經(jīng)驗(yàn)，因?yàn)橐恍┍容^特殊的原因，我自己培養(yǎng)接觸過近300種細(xì)胞，常用于做實(shí)驗(yàn)的，累積有百余種，可以說遇到過許多各式各樣古怪的細(xì)胞。這里挑細(xì)胞消化開始做我的篇專題，并不是因?yàn)榧?xì)胞消化最重要，而是近期看到大家頻繁討論這個(gè)話題，我就拋磚引玉，下面幾點(diǎn)拙見，可能與其它朋友總結(jié)的一些經(jīng)驗(yàn)有點(diǎn)出入，僅供大家參考。許多同學(xué)對(duì)細(xì)胞消化做了許多研究，得出了很多有價(jià)值的經(jīng)驗(yàn)，也見到很多人的困惑。其實(shí)細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是細(xì)胞系的培養(yǎng)，就消化而言，不是太難，做得多了，善于總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，就能把細(xì)胞越養(yǎng)越好。一般的程序步驟，細(xì)節(jié)操作，我這里就不講了，只講一些基本操作背后的知識(shí)，如果不對(duì)之處，歡迎指正，總結(jié)下來，細(xì)胞培養(yǎng)中消化很重要，但其實(shí)消化并不是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵所在(雖然很重要)，關(guān)鍵所在是細(xì)胞來源，血清質(zhì)量和水源(自己配制溶液的話)。我看到版上許多人養(yǎng)細(xì)胞遇到各種各樣的問題，很多時(shí)候bottleneck沒有找到，雖然通過其它方法有所改善，但仍然是事倍功半。因?yàn)槿藗兺⒁庾约旱牟僮?，總覺得自己沒有經(jīng)驗(yàn)，而忽視試劑，溶液尤其是細(xì)胞的質(zhì)量，后者其實(shí)才是許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常見的問題。

Capan-2細(xì)胞：人胰腺癌細(xì)胞

細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

HA-VSMC細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

TALL-1細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：維持細(xì)胞密度在4×105-1×106 cells/ml之間，2-3天換液1次??；細(xì)胞形態(tài)特性：淋巴母細(xì)胞；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：該細(xì)胞源于一名復(fù)發(fā)T-ALL（急性T淋巴細(xì)胞性白血?。┑膬和耐庵苎?；具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)中都能破壞腫瘤細(xì)胞；IL-2可使細(xì)胞更好地生長(zhǎng)；α/β TCR陽性，γ/δ TCR陰性；可產(chǎn)生IFNγ、TNF-α和GM-CSF。

SN12C細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：2x10^4 cells/ml；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

MUM-2B細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：脈絡(luò)膜黑色素瘤；女性

ZRLC-1細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

細(xì)胞接收操作說明：請(qǐng)仔細(xì)閱讀本操作說明及相應(yīng)的細(xì)胞說明書。本公司細(xì)胞發(fā)貨有四種形式：T25培養(yǎng)瓶(一般是貼壁細(xì)胞使用，懸浮細(xì)胞也可以)、離心管(懸浮細(xì)胞使用多，當(dāng)然，有些公司也會(huì)用這種離心管形式發(fā)貼壁細(xì)胞，但是，長(zhǎng)期經(jīng)驗(yàn)來說，貼壁細(xì)胞容易發(fā)生形態(tài)變化，估計(jì)是細(xì)胞培養(yǎng)空間狹小，血清不足導(dǎo)致(最主要是怕運(yùn)輸延誤導(dǎo)致這些情況發(fā)生)，個(gè)人不建議用離心管形式發(fā)貼壁細(xì)胞)及干冰(凍存細(xì)胞用，主要是冬天天氣冷，溫度低于4℃的地方，都要考慮凍存細(xì)胞)。T25培養(yǎng)瓶：是用T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶直接發(fā)貨的形式。收到細(xì)胞后，拆開包裝T25培養(yǎng)瓶的自封袋，不拆封口膜，表面噴75%酒精消毒后顯微鏡觀察細(xì)胞狀態(tài)(有條件可以拍下此時(shí)細(xì)胞照片)。將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱平衡兩小時(shí)以上，再處理細(xì)胞。首先將T25中培養(yǎng)基取出裝好備用，如細(xì)胞密度高于80%，可以直接消化傳代，相反則加入5-6ml培養(yǎng)基放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)即可。離心管：是用15ml離心管發(fā)貨的形式，只用于懸浮細(xì)胞發(fā)貨。收到細(xì)胞后消毒處理及將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱平衡兩小時(shí)以上，再處理細(xì)胞。首先將T25中培養(yǎng)基取出裝好備用(如果實(shí)驗(yàn)室沒有T25培養(yǎng)瓶，可以暫時(shí)T75培養(yǎng)瓶，加入10-15ml培養(yǎng)基，建議10ml培養(yǎng)基，也可以使用T175培養(yǎng)瓶，加入50-60ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)瓶越大，需要的培養(yǎng)基越多。當(dāng)然如果剛接收到細(xì)胞密度不夠的話，不用大瓶子，先用小瓶子養(yǎng)起來再換大的，不然會(huì)長(zhǎng)得很慢，嚴(yán)重的，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡等危險(xiǎn))，平衡完成后，離心(1000rpm，3min)收集細(xì)胞，棄上清，用新的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并接種至培養(yǎng)瓶或皿中，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。干冰：是用本公司凍存液凍存細(xì)胞后，直接用干冰將凍存的細(xì)胞冷凍發(fā)貨的形式。收到細(xì)胞后按照細(xì)胞復(fù)蘇的步驟操作即可。

BC-022細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見細(xì)胞說明書部分；細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

8505C細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：6傳代；細(xì)胞形態(tài)特性：成纖維細(xì)胞；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

Neuro-2a細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：4傳代；2-3天換液1次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

MOPC細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：半貼壁；細(xì)胞背景資料：少突膠質(zhì)前體細(xì)胞

BMDC細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：樹突狀細(xì)胞

RPMI-8402細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：懸浮；細(xì)胞背景資料：急性T淋巴細(xì)胞白血病；女性

Capan-2細(xì)胞：人胰腺癌細(xì)胞

細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

細(xì)胞來源說明：細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系

細(xì)胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法：傳代培養(yǎng)：是指細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶以1：2或1：2以上的比例轉(zhuǎn)移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細(xì)胞，可根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法進(jìn)行細(xì)胞傳代。貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用消化法傳代，部分貼壁的細(xì)胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細(xì)胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進(jìn)行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進(jìn)行傳代。實(shí)驗(yàn)步驟：①入無菌室之前用肥皂洗手，再用75% 的酒精擦拭消毒雙手；②倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液37℃下預(yù)熱；③超凈臺(tái)臺(tái)面應(yīng)整潔，用75%酒精棉球擦拭清潔；④打開超凈工作臺(tái)的紫外燈照射臺(tái)面20min左右，關(guān)閉紫外燈，打開風(fēng)機(jī)清潔空氣除去臭氧；⑤點(diǎn)燃酒精燈;取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi)；⑥將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上；⑦倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每個(gè)大培養(yǎng)瓶加入1ml胰酶，小培養(yǎng)瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當(dāng)細(xì)胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細(xì)胞提早脫落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復(fù)吹打消化好的細(xì)胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細(xì)胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋好瓶蓋，適度擰緊后稍回轉(zhuǎn)，以利于CO2的進(jìn)入，將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱；⑩對(duì)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，步驟7-9不做。直接將細(xì)胞懸液進(jìn)行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。

細(xì)胞背景資料：詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹

Capan-2細(xì)胞：人胰腺癌細(xì)胞

細(xì)胞傳代方法：1：2-1：4傳代，2-3天換液1次。

動(dòng)物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室必備儀器進(jìn)行簡(jiǎn)單介紹：1)CO2培養(yǎng)箱：CO2培養(yǎng)箱是細(xì)胞培養(yǎng)的必備儀器，它為細(xì)胞提供了一個(gè)體外培養(yǎng)的舒適環(huán)境，如適宜的溫度、濕度、酸堿度、O2濃度等。細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)很容易受到各種細(xì)菌、微生物的感染，因此，CO2培養(yǎng)箱的滅菌和抑菌能力就顯得尤為重要；2)烘箱(干燥箱)：用于細(xì)胞培養(yǎng)的一些器械、器皿必須烘干后才能使用，玻璃器皿等須干熱消毒。干熱消毒時(shí)，烘箱內(nèi)溫度一般要達(dá)到160℃以上，通常使用鼓風(fēng)式烘箱。其優(yōu)點(diǎn)是溫度均勻、效果較好，缺點(diǎn)是升溫過程較慢。升溫時(shí)不能先升溫后鼓風(fēng)而應(yīng)鼓風(fēng)與升溫同時(shí)開始，至100℃時(shí)，停止鼓風(fēng)。需注意避免包裹器皿的紙或棉花燒焦，燒焦的碎屑可影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。消毒后不能立即打開箱門，以免驟冷導(dǎo)致玻璃器皿破裂，應(yīng)等溫度自然下降至100℃以下后可開門。3)超凈工作臺(tái)/生物安全柜：細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)無菌環(huán)境要求很高，在細(xì)胞操作時(shí)，一般需要在100級(jí)空氣質(zhì)量條件下進(jìn)行，因此超凈工作臺(tái)或生物安全柜就必須配備。4)液氮罐：為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般為液氮溫度-196℃，因此，需要液氮罐。在此環(huán)境中，一般細(xì)胞可以保存十年具有活性。5)超低溫冰箱：細(xì)胞的凍存過程需要一系列程序降溫，一般4℃下存放30min，轉(zhuǎn)放-20℃ 1 hour，再轉(zhuǎn)入-70至-80℃過夜，之后才可以轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)(-196℃)，這時(shí)就必須配備一臺(tái)-86℃超低溫冰箱。一般超低溫冰箱保存細(xì)胞可達(dá)數(shù)月，對(duì)于不需要長(zhǎng)期凍存的細(xì)胞，可暫時(shí)放于超低溫冰箱保存。6)恒溫水?。簭囊旱虺蜏乇渲腥〕黾?xì)胞凍存管需要立即放于37℃水浴中快速復(fù)蘇之后才傳代培養(yǎng)，因此，恒溫水浴也是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室必備儀器。7離心機(jī)：細(xì)胞培養(yǎng)需要離心收集傳代細(xì)胞，所以需要配置低速的常溫離心機(jī)，對(duì)于后期細(xì)胞內(nèi)容物的分離則需要高速冷凍離心機(jī)。除上述儀器外，移液器、高壓滅菌鍋、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡也是細(xì)胞培養(yǎng)的必備儀器，發(fā)酵罐、轉(zhuǎn)瓶機(jī)等也常常見于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室。

RPMI8402細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：懸浮；細(xì)胞背景資料：急性T淋巴細(xì)胞白血?。慌?/div>