??????Fluo-4 AM是最常用的檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。分子式為C₅₁H₅₀F₂N₂O₂₃，分子量為1096.95。
??????Fluo-4 AM在Fluo-3 AM的基礎(chǔ)上改進(jìn)而成，其特點(diǎn)是加載更快并且在相同條件下熒光更加明亮。Fluo-4 AM將Fluo-3 AM結(jié)構(gòu)中的氯原子替換成了氟原子，導(dǎo)致它的激發(fā)波長會(huì)向短波長處偏離12nm左右。這個(gè)波長更接近于氬激光器的波長488nm，所以用氬激光器激發(fā)時(shí)，F(xiàn)luo-4的熒光強(qiáng)度會(huì)比Fluo-3強(qiáng)一倍。由于Fluo-4與鈣離子的親和力和Fluo-3相近，所以使用上和Fluo-3也基本相同，可以使用激光共聚焦顯微鏡、熒光酶標(biāo)儀等熒光檢測儀器來測定細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。Fluo-4 AM和Fluo-3 AM的結(jié)構(gòu)式參考圖1。

圖1. Fluo-4 AM和Fluo-3 AM的結(jié)構(gòu)式。
??????Fluo-4 AM是Fluo-4的乙酰甲酯衍生物，是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fluo-4 AM的熒光非常弱，其熒光不會(huì)隨鈣離子濃度升高而增強(qiáng)。Fluo-4 AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-4，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo-4可以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，激發(fā)波長為494nm，發(fā)射波長為516nm。實(shí)際檢測時(shí)推薦使用的激發(fā)波長為488nm左右，發(fā)射波長為512-520nm。Fluo-4的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考圖2。

圖2. Fluo-4的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜
??????用于細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測時(shí)，F(xiàn)luo-4 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-4 AM的適當(dāng)溶液和細(xì)胞一起在20-37℃孵育10-60分鐘進(jìn)行熒光探針裝載，隨后適當(dāng)洗滌，洗滌后可以考慮適當(dāng)再孵育20-30分鐘以確保Fluo-4 AM在細(xì)胞內(nèi)充分轉(zhuǎn)變成Fluo-4。
??????本Fluo-4 AM(鈣離子熒光探針) 是配制于無水DMSO (anhydrous DMSO)中的儲(chǔ)存母液，濃度為2mM。
包裝清單：

保存條件：
??????-20℃避光保存，6個(gè)月有效。
注意事項(xiàng)：
??????Fluo-4 AM遇水極易分解，建議次使用時(shí)，母液分裝并密封保存，同時(shí)注意保持干燥。
??????Fluo-4 AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
??????探針的工作濃度、細(xì)胞量、孵育溫度和時(shí)間等需要根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)預(yù)先摸索。
??????熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。