Alamar Blue 檢測試劑為細胞增殖和細胞毒性檢測提供了一種簡便、快速、可靠、安全的方法，適用于高通量檢測實驗。該檢測試劑的主要成分是一種氧化還原指示劑。其在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍色無熒光性，而在還原狀態(tài)下，轉變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，吸收峰為530-560nm，而散射峰為590nm。在細胞增殖過程中，細胞內NADPH/NADP、 FADH/FAD、 FMNH/FMN 和NADH/NAD 的比值升高，處于還原環(huán)境。攝入細胞內的染料被這些代謝中間體及細胞色素類還原后釋放到細胞外并溶于培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍變成有熒光的粉紅色。最后用普通分光光度計或熒光光度計進行檢測，吸光度和熒光強度與活性細胞數(shù)成正比。
操作說明：
1. 在100 微升細胞懸液中加入10 微升的檢測試劑，在細胞培養(yǎng)箱內孵育2-6 小時，培養(yǎng)基的顏色由靛青藍開始變成粉紅色就可以進入下一步。
2. 推薦使用熒光酶標儀進行檢測，激發(fā)光波長在530-560 nm 之間，發(fā)射光波長為590 nm，記錄相對熒光單位(RFU)。
3. 繪制標準曲線或細胞生長曲線：縱座標(Y 軸)為相對熒光單位(RFU);橫坐標(X 軸)為細胞數(shù)或時間點或藥物濃度。
注意事項：
1. 合適密度的細胞可以增加檢測靈敏度。對于96 孔板，我們建議每孔接種100 微升細胞，細胞濃度范圍為：貼壁細胞在100-10,000/孔，懸浮細胞在2,000-50,000/孔，并以培養(yǎng)基為空白對照。對于384 孔板，細胞濃度和接種量均減半。
2. 整個過程均應為無菌操作，因為微生物污染物同樣可以還原檢測試劑而影響實驗結果。
3. 注意接種細胞濃度和加入檢測試劑后孵育時間。細胞濃度過高或孵育時間過長，會導致繼發(fā)性還原反應，產(chǎn)生無色和熒光消失。
4. 孵育時，須避光。
5. 本產(chǎn)品可以使用熒光或分光光度檢測，但熒光的靈敏度高，實驗誤差小，推薦使用熒光檢測。