基于先進的腺病毒技術平臺,維洛信現(xiàn)提供AAV定制服務,可適用于多種基因操作與編輯策略。我們采用三質(zhì)粒共轉染的Helper-free系統(tǒng)在293T細胞中進行AAV的生產(chǎn)與包裝,并建立了完善的純化與質(zhì)控方法,生產(chǎn)的AAV顆粒可直接應用于各類體內(nèi)體外實驗。
- 基于CRISPR的基因敲除的AAV載體構建與包裝
CRISPR系統(tǒng)是目前最常用的基因打靶系統(tǒng)之一。維洛信提供基于CRISPR系統(tǒng)的AAV載體構建預包裝服務,根據(jù)目的基因設計short guide RNA (sgRNA) 序列并構建入我們專有的AAV載體pAAV-CR,進而斷裂DNA雙鏈,實現(xiàn)對基因的精確敲除。
-Cre-LoxP重組系統(tǒng)的AAV載體構建與包裝
將Cre-LoxP重組系統(tǒng)與具有高效和特異感染的AAV載體結合,實現(xiàn)目的基因組織和時間的可控表達。
-Tet-on轉錄系統(tǒng)的AAV載體構建與包裝
四環(huán)素轉錄調(diào)控系統(tǒng)(Tetracycline-Controlled Transcriptional Activation, Tet-on/off)是能夠定時開啟/關閉特定基因表達的轉錄調(diào)控系統(tǒng)。維洛信提供Tet-on轉錄系統(tǒng)的AAV載體構建與包裝服務,實現(xiàn)基因的誘導表達。
腺相關病毒優(yōu)勢:
1. 宿主范圍廣:可感染分裂細胞與非分裂細胞;多種亞型具有多種組織親嗜性,可以應用于神經(jīng)系統(tǒng)、心肌、肝臟、眼睛、肌肉等定位注射。
2. 擴散性佳:體積小、滴度高,具有遠優(yōu)于腺病毒與慢病毒的擴散性,可穿越血腦屏障,是優(yōu)秀的神經(jīng)元與膠質(zhì)細胞感染工具。
3. 安全系數(shù)高:迄今未發(fā)現(xiàn)野生型AAV對人體致??;ITR與rep/cap基因分別由獨立的質(zhì)粒傳導表達,進一步去除感染風險。
4. 免疫原性低:僅4.7kb的基因組便于重組DNA技術操作,在動物實驗中局部大劑量使用極少造成非特異性反應與免疫抑制。
5. 長時穩(wěn)定表達:AAV感染可介導外源基因發(fā)生低頻(<2%)定向整合,絕大多數(shù)重組AAV感染細胞后不會整合入基因組,而是在宿主細胞內(nèi)形成伴隨體,因此AAV能夠介導外源基因長期、穩(wěn)定的復制轉錄。
6. 穩(wěn)定性好:AAV在60℃不會被滅活,能抵抗多種有機溶劑的處理(例如氯仿)
不同的AAV亞型具有不同的組織嗜親性,我們推薦根據(jù)實驗靶向的器官/細胞,選擇具有相應親和性的AAV亞型進行構建,能夠有效提高感染效率。
服務流程:
1. 方案溝通
2. 基因克隆:將目的基因片段構建入我們的專有AAV轉移質(zhì)粒,測序驗證
3. 病毒包裝:三質(zhì)粒共轉染(轉移質(zhì)粒+病毒包裝質(zhì)粒+輔助質(zhì)粒)入293T細胞
4. 收毒:72h孵育后分別收獲培養(yǎng)上清與細胞沉淀中的病毒
5. 純化濃縮:碘克沙醇梯度離心,高效的分離空衣殼病毒與細胞雜質(zhì),將具備感染力的病毒富集到90%以上;超濾濃縮
6. 質(zhì)量控制:
- 多重酶切質(zhì)粒鑒定
- qPCR檢測病毒滴度
- SDS-PAGE/考馬斯亮藍測定純度
- 細胞轉導檢測(帶有熒光標簽)
- HPLC/內(nèi)毒素檢測/微生物檢測(高純度AAV可選)
交付內(nèi)容:
定制AAV病毒顆粒
對照病毒(可用于轉導測試)
詳細實驗報告
維洛信腺相關病毒平臺:
1. 創(chuàng)新性AAV載體與嚴格制備工藝,力求獲取滴度、活性、純度與一致性的AAV產(chǎn)品
2. 多種AAV血清型可供選擇(AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9...)
3. 20余種組織特異性啟動子(CMV, CamkIIα, Human Synapsin, GFAP等)與多種報告基因(EGFP、mCherry、RFP,EYFP等)可供選擇,滿足您的不同需求
4. 滴度高:維洛信可提供10^12~10^13V.G/ml及以上滴度的病毒,滿足大部分實驗的使用要求
5. 靈活生產(chǎn):我們提供體外應用級別與體內(nèi)應用級別各種規(guī)格的病毒(小規(guī)格、中規(guī)格、大規(guī)格)的制備服務
6. 具有競爭力的價格與貨期
了解更多AAV服務請撥打137-1756-5893咨詢我們。
關鍵字: 基因編輯AAV制備
北京維洛信生物科技有限公司成立于2019年,是北京百泰派克生物科技有限公司旗下病毒技術服務平臺,主要為國內(nèi)外各各科研院所,高校,藥企,生物工程類企業(yè)提供載體構建、病毒包裝等生物學技術服務與產(chǎn)品?;谙冗M的腺病毒、腺相關病毒與慢病毒技術平臺,我們致力于快速、高純度、高滴度、高感染活力的病毒顆粒制備與生產(chǎn),并結合客戶需求與應用領域,定制高效、高性價比的一站式服務。