基于先進的腺病毒技術平臺，維洛信現(xiàn)提供AAV定制服務，可適用于多種基因操作與編輯策略。我們采用三質(zhì)粒共轉染的Helper-free系統(tǒng)在293T細胞中進行AAV的生產(chǎn)與包裝，并建立了完善的純化與質(zhì)控方法，生產(chǎn)的AAV顆粒可直接應用于各類體內(nèi)體外實驗。
- 基于CRISPR的基因敲除的AAV載體構建與包裝
CRISPR系統(tǒng)是目前最常用的基因打靶系統(tǒng)之一。維洛信提供基于CRISPR系統(tǒng)的AAV載體構建預包裝服務，根據(jù)目的基因設計short guide RNA (sgRNA) 序列并構建入我們專有的AAV載體pAAV-CR，進而斷裂DNA雙鏈，實現(xiàn)對基因的精確敲除。
-Cre-LoxP重組系統(tǒng)的AAV載體構建與包裝
將Cre-LoxP重組系統(tǒng)與具有高效和特異感染的AAV載體結合，實現(xiàn)目的基因組織和時間的可控表達。
-Tet-on轉錄系統(tǒng)的AAV載體構建與包裝
四環(huán)素轉錄調(diào)控系統(tǒng)（Tetracycline-Controlled Transcriptional Activation, Tet-on/off）是能夠定時開啟/關閉特定基因表達的轉錄調(diào)控系統(tǒng)。維洛信提供Tet-on轉錄系統(tǒng)的AAV載體構建與包裝服務，實現(xiàn)基因的誘導表達。
腺相關病毒優(yōu)勢：
1. 宿主范圍廣：可感染分裂細胞與非分裂細胞；多種亞型具有多種組織親嗜性，可以應用于神經(jīng)系統(tǒng)、心肌、肝臟、眼睛、肌肉等定位注射。
2. 擴散性佳：體積小、滴度高，具有遠優(yōu)于腺病毒與慢病毒的擴散性，可穿越血腦屏障，是優(yōu)秀的神經(jīng)元與膠質(zhì)細胞感染工具。
3. 安全系數(shù)高：迄今未發(fā)現(xiàn)野生型AAV對人體致??；ITR與rep/cap基因分別由獨立的質(zhì)粒傳導表達，進一步去除感染風險。
4. 免疫原性低：僅4.7kb的基因組便于重組DNA技術操作，在動物實驗中局部大劑量使用極少造成非特異性反應與免疫抑制。
5. 長時穩(wěn)定表達：AAV感染可介導外源基因發(fā)生低頻（<2%）定向整合，絕大多數(shù)重組AAV感染細胞后不會整合入基因組，而是在宿主細胞內(nèi)形成伴隨體，因此AAV能夠介導外源基因長期、穩(wěn)定的復制轉錄。
6. 穩(wěn)定性好：AAV在60℃不會被滅活，能抵抗多種有機溶劑的處理（例如氯仿）
不同的AAV亞型具有不同的組織嗜親性，我們推薦根據(jù)實驗靶向的器官/細胞，選擇具有相應親和性的AAV亞型進行構建，能夠有效提高感染效率。
服務流程：
1. 方案溝通
2. 基因克隆：將目的基因片段構建入我們的專有AAV轉移質(zhì)粒，測序驗證
3. 病毒包裝：三質(zhì)粒共轉染（轉移質(zhì)粒+病毒包裝質(zhì)粒+輔助質(zhì)粒）入293T細胞
4. 收毒：72h孵育后分別收獲培養(yǎng)上清與細胞沉淀中的病毒
5. 純化濃縮：碘克沙醇梯度離心，高效的分離空衣殼病毒與細胞雜質(zhì)，將具備感染力的病毒富集到90%以上；超濾濃縮
6. 質(zhì)量控制：
- 多重酶切質(zhì)粒鑒定
- qPCR檢測病毒滴度
- SDS-PAGE/考馬斯亮藍測定純度
- 細胞轉導檢測（帶有熒光標簽）
- HPLC/內(nèi)毒素檢測/微生物檢測（高純度AAV可選）
交付內(nèi)容：
定制AAV病毒顆粒
對照病毒（可用于轉導測試）
詳細實驗報告
維洛信腺相關病毒平臺：
1. 創(chuàng)新性AAV載體與嚴格制備工藝，力求獲取滴度、活性、純度與一致性的AAV產(chǎn)品
2. 多種AAV血清型可供選擇（AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9...）
3. 20余種組織特異性啟動子（CMV, CamkIIα, Human Synapsin, GFAP等）與多種報告基因（EGFP、mCherry、RFP，EYFP等）可供選擇，滿足您的不同需求
4. 滴度高：維洛信可提供10^12~10^13V.G/ml及以上滴度的病毒，滿足大部分實驗的使用要求
5. 靈活生產(chǎn)：我們提供體外應用級別與體內(nèi)應用級別各種規(guī)格的病毒（小規(guī)格、中規(guī)格、大規(guī)格）的制備服務
6. 具有競爭力的價格與貨期
了解更多AAV服務請撥打137-1756-5893咨詢我們。
關鍵字： 基因編輯AAV制備
北京維洛信生物科技有限公司成立于2019年，是北京百泰派克生物科技有限公司旗下病毒技術服務平臺，主要為國內(nèi)外各各科研院所，高校，藥企，生物工程類企業(yè)提供載體構建、病毒包裝等生物學技術服務與產(chǎn)品?；谙冗M的腺病毒、腺相關病毒與慢病毒技術平臺，我們致力于快速、高純度、高滴度、高感染活力的病毒顆粒制備與生產(chǎn)，并結合客戶需求與應用領域，定制高效、高性價比的一站式服務。