名稱Easy-Lowry蛋白定量試劑盒 (Easy-Lowry Protein Assay Kit)
試劑盒組分
組分500T1000T保存
試劑(A): Folin-Ciocalteu Reagent5ml10mlRT 避光
試劑(B1): 改良Lowry Reagent | Lowry A100ml2×100mlRT
試劑(B2): 改良Lowry Reagent | Lowry B2ml4mlRT
試劑(B3): 改良Lowry Reagent | Lowry C2ml4mlRT
臨用前，按Lowry A:B:C=50:1:1比例配制改良Lowry Reagent，即配即用
試劑(C): 蛋白標準(BSA)20mg20mgRT
試劑(D): 蛋白標準配制液1.5ml1.5mlRT
試劑(E): ddH2O5ml10mlRT
自備材料
1. 酶標儀或分光光度計
2. 96孔板或離心管
【注】有效期： 6 個月有效。蛋白標準配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存。
產(chǎn)品簡介
目前世界上最常用的蛋白濃度檢測方法是：BCA蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford蛋白定量試劑盒(Bradford Protein Assay Kit)。
Phygene 改良Lowry法蛋白定量試劑盒是利用蛋白中肽鍵與銅離子結(jié)合成四配位基銅離子復合物，后者與Folin試劑(福林酚)反應(yīng)，產(chǎn)生藍色比色物，用分光光度法(酶標儀或分光光度計)檢測750nm處吸光度，并與標準曲線比較，求得待測蛋白樣品的濃度，在1～1500μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
使用說明操作步驟(僅供參考)：
1、 取1ml蛋白標準配制液加入到蛋白標準(BSA)(20mg)中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白標準溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標準溶液應(yīng)-20℃保存。
2、 取適量 20mg/ml 蛋白標準，稀釋至終濃度為 1500μg/ml 或所需濃度。如取 75μl 20mg/ml 蛋白標準，加入 925μl 稀釋液，充分混勻，即配制1500μg/ml 蛋白標準。特別提示：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中。例如待測蛋白溶解于蔗糖中，亦取 20mg/ml 蛋白標準溶解于蔗糖中。一般也可以用0.9%NaCl 或 PBS 作為溶解 BSA 稀釋液。稀釋后的 1500μg/ml 蛋白標準也應(yīng)-20℃長期保存。
3、 根據(jù)樣品數(shù)量，按Folin-Ciocalteu Reagent : ddH2O =1:1的比例配制Folin-Ciocalteu工作液，充分混勻。
4、 根據(jù)樣品數(shù)量，按試劑(B1):試劑(B2):試劑(B3)=50:1:1的比例配制改良Lowry Reagent工作液，充分混勻。 例如取 10ml Lowry A、 0.2ml Lowry B、 0.2ml Lowry C，配制成10.4ml 改良 Lowry Reagent 工作液。
5、 將1500μg/ml蛋白標準用稀釋待測樣品的溶液5倍梯度稀釋，濃度分別為300μg/ml、60μg/ml、12μg/ml、2.4μg/ml、0μg/ml，各取40μl加到96孔板的標準品孔。
6、 加待測蛋白樣品或稀釋液(空白對照)到96孔板的樣品孔中，如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液不同，應(yīng)在待測蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液；如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液相同，無需在待測蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液。
7、 用多通道微量移液器快速將200μl 配置好的改良Lowry Reagent工作液加入至各孔， 立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動輕輕混勻30s。室溫準確孵育 10min。
8、 用多通道微量移液器快速將20μl新鮮配置的Folin-Ciocalteu工作液加至上述各孔中， 立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動輕輕混勻30s。加蓋以防止液體揮發(fā)，室溫準確孵育 30min。
9、 輕輕混勻96孔板，酶標儀或微量滴定板讀數(shù)儀測定750nm處吸光度，也可用分光光 度計測定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測體積，檢測樣品數(shù)量亦相應(yīng)減少。對比標準曲線，求得相應(yīng)待測樣品的蛋白濃度。同時建議所以樣品(包括標準品)采用三復孔，求平均值。
注意事項
1、 蛋白標準(BSA)粉末溶解于蛋白標準配制液后，即獲得蛋白標準原液，該原液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測，該蛋白標準原液-20℃長期保存。
2、 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致，有可能導致測定不準確。
3、 如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測體積。
4、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： Lowry法蛋白濃度測定試劑盒
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