簡介：免疫(共)沉淀(IP/CoIP)是基于抗體和蛋白的特異性親和作用，通過捕獲與蛋白或抗原特異性結合的抗體，進而從復雜的樣品中捕獲及富集目標蛋白，同時可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子。
實驗前：為了獲得更好的實驗結果，所有的步驟均需要根據實際情況進行優(yōu)化。
例如：根據細胞系或被捕獲的抗原后續(xù)用途的不同可選擇更加合適的細胞裂解條件。對于沒有細胞壁結構的哺乳動物細胞，可以直接使用去污劑進行裂解，但其它細胞，則需要一些機械剪切力輔助，例如超聲破碎。以下列出的（包括裂解液、孵育時間、體積及濃度）是作為初始嘗試的條件建議，最終的優(yōu)化需要根據實際情況調整。
另外，細胞裂解物在進行免疫(共)沉淀前，可先進行蛋白免疫印跡法檢測，以此來確定細胞裂解物里存在目標蛋白。
一、試劑盒組分
二、使用方法
A. 制備細胞裂解物
1. 吸干培養(yǎng)基。添加含有調節(jié)分子的新鮮培養(yǎng)基，使其在預定的時間內對細胞進行處理。
2. 收集細胞，去除培養(yǎng)基后用冰預冷的 1 X PBS 洗滌細胞一次。
3. 去除 PBS 并在每個細胞板上（10 cm）加入 0.5 ml 冰預冷的 Lysis buffer，并在冰上孵育至少5分鐘。
4. 從板上刮下細胞，把提取物轉移至微量離心管。置于冰上。
5. 在冰上進行 3 次超聲破碎，每次 5 秒。
6. 在 4 °C，在 14,000 x g 條件下，微量離心10分鐘，將上清轉移到新管中。上清液即為細胞裂解物。如有必要，裂解物可保存在 -80 °C。
注：細胞裂解物制備好之后，可先進行蛋白免疫印跡法檢測，以此來確定細胞裂解物里存在目標蛋白。
B. 免疫沉淀法
a) 細胞裂解物預清除（可選步驟）
1. 向 500 μl（含總蛋白 200 -1000 ug）細胞裂解物中添加 5 μl Protein A 和 5 μl Protein G。
2. 在 4 °C 下，旋轉孵育 30 - 60 分鐘。
3. 4°C 條件下 12000g 離心1分鐘，保留上清，待用。
b) 抗原抗體結合
1. 在新的離心管內加入 500 μl （含總蛋白 200 – 1000 ug）細胞裂解物（可以是預清洗后的細胞裂解物）。
2. 加入目標蛋白的單克隆/多克隆抗體（1 – 5 μg）。
3. 同時采用非特異免疫的同源抗體作為對照。
4. 在 4 °C 輕柔混合過夜。
c) 免疫復合物沉淀
1. 抗體孵育過夜后，加入 5 μl Protein A 和 5 μl Protein G。
2. 在 4 °C 溫和地混勻1- 3小時或過夜。
3. 3. 12,000 g 離心1 分鐘，保留沉淀。
4. 使用 0.5 ml 1*Wash buffer 清洗沉淀，12,000 g 離心1分鐘，保留沉淀。
5. 重復第4步，共計清洗3次。
注：清洗，去上清的時候需要注意避免吸走填料
C. 用蛋白免疫印跡法進行分析
1. 在 20 - 40 μl 1*SDS 樣品緩沖液中重懸沉淀物，渦旋振蕩，然后再微量離心30秒，以使附著管壁的珠子和液體到管底。
2. 將樣品加熱至 95 - 100 °C 并持續(xù)2 - 5分鐘，然后在 14,000 g下瞬時離心1分鐘，取上清液。
3. 將樣品（15 – 30 μl）上樣到 SDS-PAGE 凝膠上。
4. 用蛋白質印跡法分析樣品。