白細(xì)胞裂解液

產(chǎn)品及特點(diǎn) ：本產(chǎn)品為即用型白細(xì)胞裂解溶液，可以用于裂解分離純化好的血液白細(xì) 胞，用于 DNA 提取、RNA 提取等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

規(guī)格及成分： 成份 編號(hào) 大立盒包裝 白細(xì)胞裂解液  250 mL 使用手冊(cè)  1 份

運(yùn)輸及保存 ：常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

自備試劑： Tris 飽和酚、氯仿、乙酸鈉溶液、乙醇、TE 緩沖液等

使用方法： 下面以 DNA 提取為例：

1. 取新鮮抗凝血 5 mL，在 10 mL 或 15 mL 的塑料離心管中用紅細(xì)胞裂 解液裂解紅細(xì)胞（紅細(xì)胞裂解液有幾種配方，用戶需要根據(jù)所選產(chǎn)品的 使用手冊(cè)進(jìn)行操作，這里不列出每種的詳細(xì)步驟），也可以直接 2500 rpm 離心 5 分鐘后取白細(xì)胞層到一新的 10 mL 或 15 mL 的塑料離心 管中。

2. 在所得的白細(xì)胞沉淀中或所得白細(xì)胞層溶液中加自備的生理鹽水使得 白細(xì)胞的終體積為 2 mL。

3. 加 1 mL 的本產(chǎn)品，混勻后 55℃ 保溫 3 小時(shí)，其間輕輕振搖數(shù)次。

4. 加入 3 mL 自備的 Tris 飽和酚，輕輕震搖 5 分鐘，使得水相和酚相充 分分開(kāi)。

5. 3500 rpm 離心 15 分鐘，上層水相含 DNA，中間白色層為蛋白質(zhì)， 下層為酚相。

6. 將非常粘稠的含 DNA 的上清液轉(zhuǎn)移到一干凈的 10 mL 或 15 mL 的塑 料離心管中。

7. 再用 Tris 飽和酚重復(fù)上面的抽提步驟，直到離心后中間層沒(méi)有白色的 蛋白出現(xiàn)為止。

8. 在上清液中加入等體積的自備的氯仿，輕輕震搖 5 分鐘，3500 rpm 離 心 5 分鐘，轉(zhuǎn)移上清液到一干凈的 10 mL 或 15 mL 的塑料離心管中。 此步可以除去殘留的酚。

9. 在上清液中加入 0.1 倍體積的自備的 3 M 乙酸鈉溶液（pH 5.2）和 2 倍體積的無(wú)水乙醇，輕柔顛倒混勻，將出現(xiàn)絮狀的 DNA 沉淀。

10. 用移液槍頭將 DNA 沉淀挑取出來(lái)，轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 的塑料離心管中， 用 75%的乙醇浸泡 2 次。此操作可以去除 DNA 中殘留的鹽離子。

11. 轉(zhuǎn)移 DNA 沉淀到一個(gè) 1.5 mL 的塑料離心管中，空氣中放置 10 分鐘 左右待乙醇揮發(fā)后，加入 0.5 mL 自備的 TE 緩沖液溶解 DNA，4℃放 置待用。