LAMP擴(kuò)增陽性對照

產(chǎn)品及特點本產(chǎn)品為 LAMP 擴(kuò)增專用的陽性對照，用于判斷、分析 LAMP 等溫擴(kuò)增結(jié)果。LAMP 等溫擴(kuò)增，即 Loop-Mediated Isothermal Amplification（環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增），是 2000 年才出現(xiàn)的一種新穎的等溫核酸擴(kuò)增方法。它利用4 條模板專一的特異引物和具有鏈置換能力的 DNA 聚合酶，在等溫條件下63℃左右）30－60 分鐘完成擴(kuò)增。該技術(shù)在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標(biāo)上能媲美甚至優(yōu)于 PCR 技術(shù)，同時還不需要模板的熱變性、溫度循環(huán)、電泳及紫外觀察等過程，不依賴任何專門的儀器設(shè)備。目前已成功應(yīng)用于人類及動植物、細(xì)菌、病毒、寄生蟲、真菌等病原體的快速檢測。

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 LAMP Mix 、Bst DNA 聚合酶、MgCl2 溶液、超純水等

使用方法 1. 在冰上溶解除酶外的各種組份，其中 LAMP Mix（2× ）、MgCl2（25 mM）和 Bst DNA 聚合酶（8 U/uL）等試劑自備（參照本公司產(chǎn)品 100203組分），混勻，稍離心。在反應(yīng)管中加入以下組份：成份 陰性對照管 陽性對照管

LAMP Mix（2×） 10 uL 10 uL

對照引物混合物 4.0 uL 4.0 uL

對照模板 DNA 不加 1 uL

MgCl2（25 mM） 3 uL 3 uL

Bst DNA 聚合酶（8 U/uL） 1.5 uL 1.5 uL

水 1.5 uL 0.5 uL

2. 混勻，置于 60-65℃保溫 120 分鐘。

3. 80℃下保溫 10 分鐘滅活 Bst DNA 聚合酶。

4. 產(chǎn)物置于-20℃?zhèn)溆没蛄⒓从糜谙掠螜z測。擴(kuò)增產(chǎn)物可選下列方法之一檢測:

1) 瓊脂糖凝膠電泳。取擴(kuò)增產(chǎn)物 5 uL，1-2%的瓊脂糖凝膠電泳，可見LAMP 特征性電泳圖譜；

2) 向擴(kuò)增產(chǎn)物中直接加入本公司 PCR 級綠如藍(lán)染料（另售）1 uL，混勻，稍離心。將反應(yīng)管置于紫外透射儀或凝膠成像系統(tǒng)中，紫外燈下可見綠色熒光產(chǎn)生；

3) 熒光定量檢測。