農(nóng)桿菌LBA4404化學(xué)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品及特點本產(chǎn)品為農(nóng)桿菌 LBA4404 的化學(xué)感受態(tài)細胞，其具有利福平和鏈霉素抗 性，適用于玉米、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作，經(jīng) pCAMBIA2301 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化 效率高達 103cfu/μg。 
規(guī)格及成分 成分 編號 十孔盒包裝
LBA4404 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞 140385 10×100 μL
使用手冊 140385sc 1 份

運輸及保存 干冰運輸，-80℃保存，有效期一年。

自備試劑 質(zhì)粒 DNA、液氮等

使用方法轉(zhuǎn)化前準備

1. 冰水浴和 37℃水浴。

2. 液氮或干冰/乙醇混合物。

3. 將抗性平板在 28℃培養(yǎng)箱中平衡至少 15 分鐘。 轉(zhuǎn)化方法 1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞于冰水浴中融化。 2. 無菌條件下，向剛剛?cè)诨母惺軕B(tài)細胞懸液中加入需要轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒，每 100 μL 感受態(tài)細胞加 1ug 質(zhì)粒 DNA，輕柔混勻。冰水浴中靜置 10 分鐘。 3. 將離心管置于液氮中速凍 5 分鐘（注：也可以用干冰和無水乙醇混合物替代 液氮）。

4. 迅速將離心管置于 37℃水浴靜置中 5 分鐘，不要晃動水面。然后快速轉(zhuǎn)至 冰水浴中靜置 5 分鐘。

5. 加入 800 μL 無抗生素的 2×YT 或 LB 液體培養(yǎng)基，28-30℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。使菌體復(fù)蘇，表達抗性。

6. 5000rpm 離心 1 分鐘收菌，保留 100 μL 左右上清，輕輕吹打重懸菌體， 均勻涂布到含有相應(yīng)抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上，待平板中的液體完全 吸收后，倒置平板，28-30℃培養(yǎng) 48-72 小時。