DpnI

DpnI內(nèi)切酶為信裕生物最新研發(fā)產(chǎn)品，基本信息如下：

甲基化干擾？

*，該位點甲基化后才可以被DpnI所識別并酶切。
DpnI識別并酶切DNA雙鏈中腺嘌呤N6位甲基化(N6-methyladenine)的GATC序列。DpnI識別位點中兩個腺嘌呤的N6位都甲基化時，呈現(xiàn)正常的酶活力；只有一個腺嘌呤的N6位甲基化時，酶切活力會降低約60倍。
從dam⁺(Dam甲基化酶表達陽性)大腸桿菌菌株如DH5α等提取的質(zhì)粒的GATC序列中腺嘌呤N6位被甲基化，從而可以被DpnI識別和酶切；而從dam^-(Dam甲基化酶表達陰性)大腸桿菌菌株如JM110等提取的質(zhì)粒的GATC序列中腺嘌呤N6位沒有被甲基化，從而不能被DpnI識別和酶切(參考圖1)。

圖1.DpnI酶活性檢測結(jié)果圖。A.分別用從JM110菌株(dam^-)和DH5α菌株(dam⁺)中提取的質(zhì)粒400ng，在20μl酶切體系中，分別加入或不加入10U的DpnI，37℃酶切1小時，然后電泳分析。圖中可見從DH5α中提取得到的甲基化質(zhì)?？梢员籇pnI完全消化，而對于從JM110中提取得到的非甲基化質(zhì)粒沒有任何非特異性的酶切作用。B.取圖A中各酶切產(chǎn)物5μl分別轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細胞然后涂板，培養(yǎng)過夜。圖中可見從DH5α中提取得到的甲基化質(zhì)粒被DpnI消化1小時后，不會產(chǎn)生任何克隆，進一步驗證了DpnI在1小時內(nèi)可以完全消化甲基化的質(zhì)粒，并確保本產(chǎn)品可以用于質(zhì)粒點突變。

酶儲存液組成為：10mM Tris-HCl (pH7.4 at 25℃)，300mM NaCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.5mg/ml BSA and 50% glycerol。
1X Buffer Y組成為：33mM Tris-acetate (pH7.9 at 37℃)，10mM magnesium acetate，66mM potassium acetate，0.1mg/ml BSA。
酶切和連接效率：50倍過量的本內(nèi)切酶消化1小時，>70%被酶切的pBR322 DNA片段可以重新連接，這些片段>95％可以被重新酶切(recut)。
活性單位定義：在37℃，50微升反應體系中反應1小時，將1微克的λDNA完全分解的酶量定義為1個活性單位，即1U。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存。
注意事項： 
內(nèi)切酶使用時宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
如果發(fā)現(xiàn)預期的酶切位點不能切開，請確認特定位點是否已經(jīng)被甲基化。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
 

使用說明：
1. 單酶切時可以參考如下反應體系進行：

說明：請注意把Buffer和水等充分混勻后再加入內(nèi)切酶，加入內(nèi)切酶后可以用槍吹打或輕輕Vortex混勻。通常參考上述條件孵育1小時已經(jīng)足夠，但多孵育數(shù)小時甚至孵育過夜也不會產(chǎn)生負面影響。如果酶切較長時間甚至酶切過夜，可以使用更少量的酶。待酶切DNA量較大時，可以適當延長酶切時間或按比例放大酶切體系。
2. 雙酶切或多酶切時，需選擇適當?shù)目梢约嫒輧蓚€或多個內(nèi)切酶的緩沖液，然后參考上表設置反應體系。如果沒有合適的緩沖液可以選擇，可以在一種酶消化完畢后進行純化，純化完畢后再進行另外一種酶切反應。