生物素隨機引物DNA標記試劑盒

生物素隨機引物DNA標記試劑盒(Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)是一種通過隨機引物標記反應產(chǎn)生生物素標記DNA探針的試劑盒。本試劑盒標記的生物素DNA探針可以用于常規(guī)的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位雜交等。
在Klenow酶(Klenow fragment,3'-5'exo-)催化下，通過隨機引物標記反應(random prime labeling)可以把生物素標記的Biotin-11-dUTP摻入到新合成的DNA探針中，這樣就可以產(chǎn)生生物素標記的DNA探針。在隨機引物標記反應過程中，一些標記好的DNA探針可以被Klenow酶從模板DNA鏈上驅趕下來。這樣在模板量較少的情況下，通過隨機引物標記反應，最后可以產(chǎn)生比模板DNA量更多的生物素標記DNA探針，可多達1-15倍左右。
本試劑盒可以用于多種DNA模板的標記，包括DNA片段、線性化的質?；騝osmid、超螺旋DNA等。用于本試劑盒的模板DNA片段應不小于100bp，小于100bp的DNA模板可以使用信裕生物生產(chǎn)的生物素3'末端DNA標記試劑盒(D3106)進行DNA探針標記。
用于本試劑盒的模板DNA的量應不少于10ng，推薦的模板用量為100ng-1μg。
本試劑盒中提供了已經(jīng)用生物素標記好的Biotin-Control DNA，可以用作檢測生物素DNA探針標記效率的對照。
生物素標記DNA可以使用信裕生物生產(chǎn)的化學發(fā)光法生物素標記核酸檢測試劑盒(D3308)或其它適當試劑盒進行檢測。
本試劑盒可以用于10個標記反應。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存。
注意事項：
需自備用于探針標記效率檢測的相關試劑。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
 

使用說明：
1. 在一離心管或PCR管內(nèi)加入100ng-1μg DNA模板，再加入適量試劑盒提供的Ultrapure Water，至總體積為34μl。
說明：通常100-300ng DNA模板已經(jīng)足夠用于一次標記反應。
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X)，混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
3. 沸水浴加熱5分鐘，或在PCR儀上100℃加熱5分鐘(如果不能設置100℃，99℃加熱5分鐘也完全可以)。
4. 立即放置到預先準備好的冰水浴中至少2-3分鐘。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment，混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
7. 37℃孵育1小時或過夜(不宜超過20小時)。37℃孵育過夜可以顯著增加生物素標記DNA的產(chǎn)量，因此推薦孵育過夜(12-20)小時。
8. 加入3μl探針標記終止液，混勻，終止標記反應。至此標記反應已經(jīng)全部完成，標記好的DNA可以-20℃保存。
9. 此時探針可以直接用于探針標記效率的檢測及Southern、Northern等后續(xù)操作。
10. 整個探針標記反應的流程參見下表：

11. 探針標記效率的檢測：可以對標記好的探針進行適當梯度稀釋后，使用信裕生物生產(chǎn)的化學發(fā)光法生物素標記核酸檢測試劑盒(D3308)或其它適當?shù)姆椒ㄟM行檢測。通常探針的標記效率可以參考下表：

注意：具體的探針標記效率還和模板DNA的長度、純度等因素有關，上表的數(shù)值僅供參考。
12. 使用本試劑盒所獲得的生物素標記DNA的長度通常在數(shù)百bp左右。具體的長度因模板的長度而有所不同。例如模板DNA的長度為1kb，則生物素標記DNA產(chǎn)物的長度通常為100-1000bp，平均長度約為300bp左右。