EMSA/Gel-Shift 結合緩沖液(5X)
EMSA/Gel-Shift結合緩沖液(5X)(EMSA/Gel-Shift Binding Buffer,5X)是用于EMSA/Gel-Shift的結合緩沖液。通過EMSA，也稱gel-shift，可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的結合情況，從而可以研究細胞內(nèi)一些轉錄因子的激活水平。EMSA/Gel-Shift 結合緩沖液(5X)可以用于EMSA研究時細胞核蛋白或純化的轉錄因子和特定的雙鏈寡核苷酸的結合反應。
EMSA/Gel-Shift結合緩沖液(5X)中含有poly(dI-dC)，DTT，甘油，EDTA，氯化鈉，氯化鎂以及Tris等有效成分。其中poly(dI-dC)的濃度經(jīng)過優(yōu)化，可以很好的消除蛋白和標記探針間的非特異性結合，同時又不會減弱目的轉錄因子和標記探針間的結合。
本EMSA/Gel-Shift結合緩沖液(5X)不僅適用于同位素標記的探針，也適用于(digoxin)或生物素(biotin)標記的探針。
每個包裝的EMSA/Gel-Shift結合緩沖液(5X)，足夠進行100個蛋白和探針的結合反應。
包裝清單：
KL-005
EMSA/Gel-Shift結合緩沖液(5X)
200μl
保存條件：
-20℃保存，一年有效。
注意事項：
需自備EMSA相關的所有其它試劑。
請仔細閱讀完整個說明書后，再開始實驗操作。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 參考下面的反應體系使用EMSA/Gel-Shift 結合緩沖液(5X)：
(1) 如下設置EMSA結合反應(預期的結果參見圖1)：
(2) 按照上述順序依次加入各種試劑，在加入標記好的探針前先混勻，并且室溫(20-25℃)放置10分鐘，從而消除可能發(fā)生的探針和蛋白的非特異性結合，或者讓冷探針優(yōu)先反應。然后加入標記好的探針，混勻，室溫(20-25℃)放置20分鐘。
(3) 加入1微升EMSA/Gel-Shift上樣緩沖液(無色，10X)，混勻后立即上樣。
注意：有些時候溴酚藍會影響蛋白和DNA的結合，建議盡量使用無色的EMSA/Gel-Shift上樣緩沖液。如果對于使用無色上樣緩沖液在上樣時感覺到無法上樣，可以在無色上樣緩沖液里面添加極少量的藍色的上樣緩沖液，至能觀察到藍顏色即可。
2. 電泳分析：EMSA的典型分析結果可以參見下面的圖1。
圖1.一個典型的EMSA/Gel-Shift分析圖
1,陰性對照反應(標記探針)；
2,常規(guī)反應(含激活的目的轉錄因子的核蛋白＋標記探針)；
3,探針冷競爭反應(含激活的目的轉錄因子的核蛋白＋標記探針+標記探針100倍量的未標記探針)；
4,突變探針的冷競爭反應(含激活的目的轉錄因子的核蛋白＋標記探針+標記探針100倍量的未標記突變探針)；
5,Super-shift反應(含激活的目的轉錄因子的核蛋白＋標記探針+目的轉錄因子的特異抗體)。
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