乙酰膽堿酯酶染色試劑盒(亞鐵氰化銅法)

中文名稱：乙酰膽堿酯酶染色試劑盒(亞鐵氰化銅法)

英文名稱：Acetyl cholinesterase Staining Solution Kit

產(chǎn)品規(guī)格：2×50mL

本產(chǎn)品的染色原理是乙酰膽堿酯酶水解碘化乙酰硫代膽堿，釋放乙酸和硫代膽堿。硫代膽堿中的硫氫基(-SH)把鐵化鉀還原為亞鐵化鉀，后者與銅離子結(jié)合形成不溶性的紅棕色至深棕色的亞鐵氰化銅沉淀在酶活性部位而顯示出來。

膽堿酯酶屬于特異性酯酶，可分為兩大類。一類是乙酰膽堿酯酶又稱為真性膽堿酯酶，能水解乙酰膽堿，起到生理的調(diào)節(jié)作用；另一類為膽堿酯酶，又稱假性膽堿酯酶，能水解膽堿的酯而不能水解乙酰膽堿酯。AChE 主要存在于神經(jīng)元的胞質(zhì)內(nèi)、神經(jīng)與肌肉接頭處即所謂運(yùn)動(dòng)終板處；PsChE 主要存在于血漿、胰腺、唾液腺內(nèi)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
? 操作簡單、酯酶的擴(kuò)散較少。
?可用于觀察中樞神經(jīng)和周圍神經(jīng)纖維等疾病情況下的改變。
? 有機(jī)農(nóng)藥中毒時(shí)可使該酶受到抑制，酶的活性下降而呈陰性反應(yīng)。

試劑盒組成：

儲存條件：低溫運(yùn)輸，4℃避光保存(其中溶液A2 需常溫保存，溶液A6 需-20℃避光保存)，有效期半年。

使用方法：
1．冰凍切片，厚6μm，不固定或置于遇冷的10%甲醛鈣固定液中固定10分鐘。
2．蒸餾水洗 3次，每次1分鐘。
3．配制溶液A 混合液：臨用前，取A2 加入A1中，使后者完全溶解，得到A12 混合液。取適量的溶液A12 混合液、溶液A3、A4、A5、A6，按1：7：1：1：0.2 比例充分混勻，即可得到溶液A混合液，6小時(shí)內(nèi)使用。
 注：如果想顯示AChE和ChE，即無需區(qū)分AChE和ChE，無需加入溶液A6。
4．切片加入到預(yù)溫的配制好的溶液A混合液中，37℃避光孵育1～3小時(shí)(一般不超過6小時(shí))，至切片呈淡棕色時(shí)取出。
5．蒸餾水沖洗，鏡下觀察如活性部位仍較淡，可于蒸餾水洗后再進(jìn)行孵育，至反應(yīng)合適為止。
6．流水沖洗 5分鐘。
7．滴加溶液B 淺染細(xì)胞核3～5分鐘。
8．流水沖洗 10分鐘。
9．常規(guī)脫蠟透明，中性樹膠封固。
10．染色結(jié)果：AChE酶活性部位為紅棕至深棕色，細(xì)胞核為藍(lán)色。

陰性對照(可選步驟)
取配置好的溶液A混合液，按溶液A混合液:溶液C=50:1比例充分混勻得到溶液AC混合液。取相同切片加入溶液AC混合液中，其余操作同上，染色結(jié)果呈陰性反應(yīng)。

注意事項(xiàng)：
1．本染色液適用于冰凍切片，同時(shí)應(yīng)減少切片在室溫暴露的時(shí)間。
2．為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！