"NCI-H661 Thawing人大細胞肺癌細胞系
細胞背景資料：該細胞１９８２年建系，源自一位患有大細胞肺癌的男性的胸腔積液。該細胞角蛋白、波形蛋白陽性。
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
NCI-H661 Thawing人大細胞肺癌細胞系
細胞生長：貼壁
傳代培養(yǎng)及其操作步驟：原代細胞培養(yǎng)成功以后，需要進行分離培養(yǎng)，否則細胞會因生存空間不足或密度過大，營養(yǎng)障礙，影響細胞生長。細胞由原培養(yǎng)瓶內(nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細胞允許培養(yǎng)的細胞擴增(形成細胞株)，可以進行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征。傳代細胞形成細胞株的利處在于提供了大量持久的實驗材料，便于實驗?！静僮鞑襟E】１)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液；２)向瓶內(nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜；３)置３７℃孵箱或室溫(２５℃溫度)下進行消化，２~５min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶內(nèi)加入Hanks液少量，輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化；５)使用彎頭吸管，吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔，以防用力過猛損傷細胞；６)用計數(shù)板計數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO２培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；７)細胞培養(yǎng)換液時間應根據(jù)細胞生長的狀態(tài)和實驗要求來確定。一般２～３d后應換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴大培養(yǎng)或換成維持液?！咀⒁馐马棥浚?掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷；２)掌握好消化濃度，當消化液濃度過高時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：３—１：５傳代，每周換液２—３次
細胞培養(yǎng)過程中，總是會出現(xiàn)各種意想不到的問題，一不留神就會全盤皆輸。所謂細胞虐我千百遍，我待細胞如初戀。下面是貼壁細胞的保藏方法，希望對細胞培養(yǎng)初學操作者有所幫助：1)觀察細胞狀態(tài)：貼壁細胞密度達到85-90%，即可以細胞凍存形式進行保藏，拍照，記錄細胞狀態(tài)；2)細胞清洗：培養(yǎng)皿表面消毒后，轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，去除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)液，加入12mlPBS，輕輕搖晃培養(yǎng)皿清洗細胞，隨后吸除PBS清洗液；3)細胞消化：將2ml胰酶加入培養(yǎng)皿中，完全覆蓋細胞，置于顯微鏡下觀察（期間禁止搖晃培養(yǎng)皿），當細胞剛開始脫落時，立即轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余約0.5ml胰酶，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)消化，每30秒肉眼觀察細胞狀態(tài)，至細胞成流沙狀完全脫落，轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，加入12ml完全培養(yǎng)基，終止消化；4)細胞離心：將終止消化后的細胞懸液吹打均勻，吸取至15ml離心管中，1000r/min（110g），離心3min；5)細胞凍存：離心后去除細胞上清液，按照凍存細胞量5*10^5/ml，吸取凍存液重懸細胞沉淀，吹打均勻后分裝至相應的凍存管中，進行凍存；6)細胞保藏：凍存管做好標記，放至程序降溫盒中，于4℃冰箱放置30min，轉(zhuǎn)移至-80℃超低溫冰箱過夜，將過夜后的凍存細胞轉(zhuǎn)移至液氮中保藏。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
NCI-H661 Thawing人大細胞肺癌細胞系
細胞生長特性：貼壁生長
常規(guī)的細胞實驗(增殖，凋亡，遷移，分化之類的)，受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話(難消化細胞例外)。但少數(shù)實驗，比如病毒包裝，對細胞代數(shù)，對細胞狀態(tài)要求極高。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細胞包裝能力就會逐漸下降(當然也有其它因素影響包裝效率)。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關(guān)酶的活性，來使得細胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白；EDTA的作用。許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，trypsin切割ECM的一些負責粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細胞，添加多一些EDTA，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間(如果１０min還消化不徹底的話)，而應該想其它辦法；PBS洗滌。消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因為Serum含有抑制trypsin的蛋白。但這里面也有學問可以講，對于一些難消化細胞，那么可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子也會抑制trypsin的活性。但對于絕大部分胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化的細胞，不需要配制如此溶液。
細胞形態(tài)特性：上皮樣
KMS-18細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MALME.3M細胞、TCam 2細胞、HH [Human lymphoma]細胞
NCIADRRES細胞系相關(guān)產(chǎn)品：RWPE-1細胞、CEL細胞、Mesothelial cells transfected with pRSV-T 5A細胞
COLO 320HSR細胞系相關(guān)產(chǎn)品：A 72細胞、OV90細胞、HHL-5細胞
U-138-MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-GT-2細胞、HNSC細胞、RIN-m5F細胞
NCI-H889細胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3 88 D1細胞、MCF.10A細胞、BCAP37細胞
A-673細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H2085細胞、Biopsy xenograft of Pancreatic Carcinoma line-3細胞、KG-1a細胞
JB6 Cl 30細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MD Anderson-Metastatic Breast-435細胞、HEY-A8細胞、NCIH1184細胞
CCD 966 SK細胞系相關(guān)產(chǎn)品：A2780 CP70細胞、149PT細胞、BE2-C細胞
HLE-B3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：2PK-3細胞、HTSMC細胞、RPE-hTERT細胞
MFC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MC3T3-L1細胞、C-Li-7細胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-2細胞
UMNSAH-DF 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EOL1細胞、SK.MEL.2細胞、H2052_MM細胞
293-FT細胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3-NS1/1Ag 4.1細胞、H-2066細胞、LADMAC細胞
Pa18C細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HS-766T細胞、BSC40細胞、NCI-441細胞
Ramos 2G6 4C10細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PANC-04-03細胞、TE-85細胞、Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細胞
Hs863T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1836細胞、NIH:OVCAR-5細胞、NCIH1048細胞
MCF7/WT細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDAMB134VI細胞、PCI-4B細胞、IEC6細胞
L M (TK-)細胞系相關(guān)產(chǎn)品：UT-7細胞、FRTL-5細胞、58F細胞
UCLA-SO-M14細胞系相關(guān)產(chǎn)品：C22細胞、NCIH1563細胞、MLE 12細胞
IEC-18細胞系相關(guān)產(chǎn)品：McA-RH7777細胞、CTV1細胞、Kit 225細胞
HT-1197細胞系相關(guān)產(chǎn)品：766T細胞、GA-10 (Clone 4)細胞、HCT-8/V細胞
U 937細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EAHY-926細胞、N1S1細胞、HBdSMC細胞
U 937細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EAHY-926細胞、N1S1細胞、HBdSMC細胞
MDA361細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC0038細胞、RCC 786-O細胞、QG56細胞
Normal Rat Kidney-49F細胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-172MG細胞、Tu177細胞、HCC-1419細胞
HCC0038細胞系相關(guān)產(chǎn)品：U-373MG細胞、Hs688(A)T細胞、J-774細胞
HCET細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI H295R細胞、FM88細胞、EA.hy 926細胞
NCI-H661 Thawing人大細胞肺癌細胞系
T2 (174 x CEM.T2)細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Bowes melanoma cells細胞、NCIH2347細胞、GP2d細胞
BC-3-H-I細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CHP126細胞、Lewis Lung細胞、NBL-3細胞
TGBC-11-TKB細胞系相關(guān)產(chǎn)品：RPMI7951細胞、J82 COT細胞、LC-1 sq細胞
SNU-620細胞系相關(guān)產(chǎn)品：DoHH2細胞、NPC-TW01細胞、NCIH1435細胞
NS1-Ag 4/1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Meat Animal Research Center-145細胞、AMO-1細胞、ESC細胞
HMEC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LTEP-sm 1細胞、PCI-4B細胞、MDA-MB-134 VI細胞
NCI-H508細胞系相關(guān)產(chǎn)品：293-H細胞、NCI660細胞、JVM3細胞
PE CA PJ34細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-716細胞、H-2286細胞、U-hth74細胞
SU-86-86細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCA 7細胞、NCIH820細胞、OVCA8細胞
SNU-387細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-1395細胞、NCIH1105細胞、UMNSAH/DF#1細胞
LCLC-103H細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mouse Forestomach Carcinoma細胞、RPMI 7666細胞、PA-TU-8988S細胞
SK-MES細胞系相關(guān)產(chǎn)品：624-mel細胞、BBE細胞、MPP 89細胞
MDA-MB-468-RED細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM346細胞、Medical Research Council cell strain-5細胞、Me Wo細胞
HemECs細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Beta-TC-6細胞、H-1184細胞、COS-7細胞
MGSMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：WM 115細胞、Hs675細胞、16HBE14o-細胞
F-81細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BIC細胞、WM266細胞、X63細胞
KTC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：VMM39細胞、3T3 Swiss Albino細胞、HCC-94細胞
HSC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PC 61 5.3細胞、HLMVEC細胞、HT1376細胞
DMS-114細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDAMB-231細胞、253J細胞、293AD細胞
PC 61.5.3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：alpha TC1 clone 6細胞、SK-MEL-MeWo細胞、U-251-MG細胞
Madison 109細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-BL2141細胞、SK RC 52細胞、H510細胞
BV-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKG IIIa細胞、INS1-E細胞、Mo7e細胞
Lewis lung carcinoma line 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA157細胞、IPEC-1細胞、SNU119細胞
NCI-H841細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BNL.1ME A.7R.1細胞、NOZAWA細胞、Colo16細胞
Hs895.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BMU-S1細胞、D10細胞、H1395細胞
OCI/AML-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC94細胞、SKNFI細胞、HC11細胞
H1963細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK Col 1細胞、GA-10 clone 4細胞、MCF-7/ADR細胞
293A細胞系相關(guān)產(chǎn)品：WC00044細胞、A-2058細胞、4175細胞
SCC-25細胞系相關(guān)產(chǎn)品：ZR75-1細胞、HUT 28細胞、RPMI #1846細胞
ECC10細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCT116細胞、AM-38細胞、UPCISCC090細胞
U138MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HT3細胞、Y3.AG.1.2.3細胞、MSTO-211 H細胞
Hs 611.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PE/CA-PJ34 (clone C12)細胞、P3/X63-Ag8細胞、HPAF/CD18細胞
SK-RC-39細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PE/CA-PJ34細胞、BT.549細胞、COR-L51細胞
NCI-H661 Thawing人大細胞肺癌細胞系
SCC 9細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MLE-12細胞、SK-MEL-24細胞、GM03671C細胞
A375SM細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PBMC細胞、MKN-7細胞、SLMT1細胞
A375SM細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PBMC細胞、MKN-7細胞、SLMT1細胞
SupB15WT細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-1944細胞、IGROV 1細胞、ME 180細胞
Psi-2-DAP細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EAC-E2G8細胞、IEC-6細胞、OKa-C-1細胞
SW-1116細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CL1細胞、Transformed Human Liver Epithelial-3細胞、MODE-K細胞
Tissue Culture-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CA-46細胞、HCC1419細胞、WC00059細胞
HUASMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HC11細胞、SKLU01細胞、hTERT-HME1細胞
GT1-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LY-R細胞、BCaP 37細胞、2B4細胞
N1S1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NTera2 cl.D1細胞、373MG細胞、RCF細胞
HSC3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Panc3_27細胞、NCI-H498細胞、HuTu-80細胞
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