ET_A receptor ( Ki = 4.7 nM ); ET_A receptor ( Ki = 95 nM )

體外活性：波生坦競爭性拮抗[125 I]標記的ET-1對人平滑肌細胞（ET-A受體）、人胎盤（ET-B受體）的特異性結合。波生坦還抑制豬氣管上選擇性 ET-B 配體的結合。離體大鼠主動脈 (ET-A) 中 ET-1 誘導的收縮和大鼠氣管中選擇性 ET-B 激動劑 sarafotoxin S6C 誘導的收縮被波生坦競爭性抑制（pA2 分別 = 7.2 和 6.0），內(nèi)皮依賴性舒張也是如此。兔腸系膜上動脈中sarafotoxin S6C (pA2= 6.7)。波生坦對其他 40 種肽、前列腺素、離子和神經(jīng)遞質(zhì)的結合沒有顯著影響，這顯示了其對 ET 受體的特異性。細胞測定：進行了一項體外研究，測量波生坦對真皮微血管內(nèi)皮細胞 (MVEC) 血管生成性能的影響，并檢測波生坦抵消系統(tǒng)性硬化癥血清抗血管生成作用的能力。研究發(fā)現(xiàn)，波生坦顯著增加細胞活力，抵消系統(tǒng)性硬化癥血清對真皮 MVEC 的抗血管生成作用。

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波生坦/Bosentan是一種雙重內(nèi)皮素受體拮抗劑，通過逆轉(zhuǎn)Fli1在SSc皮膚成纖維細胞中的轉(zhuǎn)錄活性來降低COL1A2基因的表達[2]
之前的報告表明，波生坦是一種雙ET受體拮抗劑，可以逆轉(zhuǎn)SSc成纖維細胞的促纖維化表型。然而，Bosentan/波生坦對SSc成纖維細胞發(fā)揮顯著抗纖維化作用的詳細機制仍然未知。我們之前已經(jīng)證明，F(xiàn)li1缺乏有助于SSc成纖維細胞中促纖維化表型的建立，而靶向c-Abl/PKC-δ/Fli1通路的甲磺酸伊馬替尼逆轉(zhuǎn)了這些細胞的促纖維化表型。鑒于SSc成纖維細胞被轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）的自分泌刺激組成型激活，TGF-β是ET-1的強效誘導劑，并產(chǎn)生過量的ET-1，自分泌ET-1似乎參與了SSc成細胞的自激活系統(tǒng)。目前觀察到ET-1使Fli1的轉(zhuǎn)錄活性失活，這表明波生坦阻斷自分泌ET-1通過重新激活Fli1的翻譯阻遏物活性逆轉(zhuǎn)了SSc成纖維細胞的促纖維化表型。為了解決這個問題，我們使用培養(yǎng)的SSc皮膚成纖維細胞進行了一系列實驗。[2]
支持自分泌ET-1對SSc皮膚成纖維細胞活化的貢獻，外源性ET-1不影響I型膠原表達（圖5A），而Bosentan/波生坦以劑量依賴的方式抑制I型膠原的表達，對SSc真皮成纖維細胞的細胞存活率沒有任何影響（圖5B和表1）。此外，在用波生坦治療的SSc皮膚成纖維細胞中，c-Abl的總水平和磷酸化水平以及PKC-δ的總水平及核定位降低（圖5C和5D）。一致地，在用波生坦治療的SSc皮膚成纖維細胞中，蘇氨酸312處的Fli1磷酸化減少（圖5E），F(xiàn)li1在COL1A2啟動子上的占有率增加（圖5F）。重要的是，波生坦不影響SSc皮膚成纖維細胞中FLI1基因的mRNA水平（圖5G）?？偟膩碚f，這些結果表明，自分泌ET-1有助于激活SSc皮膚成纖維細胞，波生坦通過增加Fli1的DNA結合能力逆轉(zhuǎn)了SSc皮膚成纖維細胞的促纖維化表型。[2]

靜脈注射和口服給藥后，波生坦均可抑制大 ET-1 的加壓反應，作用持續(xù)時間長，且無內(nèi)在激動劑活性。波生坦還抑制 ET-1 和 sarafotoxin S6C 的抑制和升壓作用。其藥理學特征使波生坦成為治療與血管收縮相關的臨床疾病的潛在有用藥物。波生坦是第一個口服非肽混合 ETA/B 受體拮抗劑。波生坦的長期治療顯著提高了慢性心力衰竭大鼠的生存率、血流動力學和心臟重塑。波生坦降低動脈血壓的程度與血管緊張素轉(zhuǎn)換酶 (ACE) 抑制劑相似。急性 MI 后患有 CHF 的大鼠服用波生坦可顯著降低動脈血壓，并且與 ACE 抑制劑具有相加效應。波生坦的急性和慢性治療還可以通過降低外周和肺血管阻力以及增加 CHF 患者的心輸出量來改善全身和肺血流動力學。

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波生坦增加了BLM誘導的SSc小鼠模型皮損皮膚成纖維細胞中Fli1蛋白的表達[2]
最后，我們研究了波生坦是否會增加BLM誘導的SSc小鼠模型皮損皮膚成纖維細胞中Fli1蛋白的表達，因為之前的報告表明，波生坦可以預防該模型中皮膚纖維化的發(fā)展。由于我們可以再現(xiàn)波生坦對BLM治療小鼠皮膚纖維化的預防作用（圖6A），我們在這些小鼠的皮膚樣本中對Fli1進行了免疫染色。如圖6B所示，在沒有波生坦的情況下，BLM處理的小鼠皮膚成纖維細胞中Fli1陽性皮膚成纖維纖維細胞的數(shù)量比PBS處理的小鼠減少得多。相比之下，當施用波生坦時，BLM處理的小鼠和PBS處理的小鼠之間Fli1陽性皮膚成纖維細胞的數(shù)量相當。重要的是，F(xiàn)li1和肌成纖維細胞的標志物α-SMA在雙重免疫熒光中的信號在大多數(shù)皮膚成纖維細胞中是互斥的（圖6C），表明Fli1的表達與體內(nèi)皮膚成纖維纖維細胞的失活密切相關?？偟膩碚f，這些結果表明，波生坦通過增加損傷皮膚成纖維細胞中Fli1蛋白的表達，至少部分地預防了BLM誘導的SSc小鼠模型中皮膚纖維化的發(fā)展。

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DSS大鼠最大有效劑量的測定以及觀察到馬西坦的最大療效大于Bosentan波生坦[3]
DSS大鼠的MAP升高至約180 mm Hg。不同實驗組的MAP和HR基線值相似。急性口服后，macitentan劑量依賴性地降低了DSS大鼠的MAP。最大有效劑量為30mg/kg；該劑量使MAP降低了30±5 mm Hg（表1）。給藥后約24小時達到最大效果（Tmax）。急性口服波生坦可劑量依賴性地降低DSS大鼠的MAP。在100 mg/kg的最大有效劑量下，波生坦使MAP降低了15±2 mm Hg（表1），Tmax在6小時。未觀察到對HR的影響。根據(jù)這些數(shù)據(jù)，為附加研究選擇了30 mg/kg的馬西坦和100 mg/kg的波生坦的最大有效劑量。波生坦的Tmax為6小時，馬西坦為24小時。

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使用附加方案在DSS大鼠中確認選擇馬西坦和Bosentan/波生坦的最大有效劑量[3]
使用附加方案證實了最大有效劑量的馬西坦和波生坦的使用：與馬西坦上的賦形劑相比，在馬西坦30 mg/kg的基礎上服用馬西坦30mg/kg不會導致額外的MAP降低（-29±2和-28±5 mm Hg）。當波生坦100 mg/kg達到最大效果時，與波生坦上的賦形劑相比，波生坦100mg/kg不會引起額外的MAP降低（分別為-13±2和-14±3 mm Hg；圖2）。

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在DSS大鼠中使用附加方案對馬西坦和Bosentan波生坦進行比較[3]
當達到波生坦100 mg/kg的最大效果時，口服馬西替坦30 mg/kg，與在波生坦100mg/kg的基礎上服用賦形劑相比，MAP額外降低了19 mm Hg（p<0.01）。馬西替丹引起的最大降低為33±4 mm Hg（圖2）。相反，當達到馬西坦30mg/kg的最大效果時，以100mg/kg的劑量口服波生坦，與在馬西坦30 mg/kg的基礎上服用的賦形劑相比，不會引起額外的MAP降低（圖3）。

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博萊霉素治療大鼠的最大有效劑量測定，并觀察到馬西坦的最大療效大于Bosentan/波生坦[3]
與鹽水滴注的大鼠相比，博萊霉素治療的大鼠MPAP增加了約13 mm Hg。不同實驗組的MPAP和HR基線值相似。急性口服macitentan和波生坦可劑量依賴性地降低博萊霉素大鼠的MPAP（表1），而不影響HR（數(shù)據(jù)未顯示）。在30 mg/kg的劑量下，MPAP的最大下降量為12±3 mm Hg，大約在給藥后24小時（Tmax）。在300 mg/kg的最大有效劑量下，波生坦使MPAP降低了7±2 mm Hg（表1），Tmax約為6小時。根據(jù)這些數(shù)據(jù)，選擇30 mg/kg的馬西坦和300 mg/kg的波生坦進行附加研究。波生坦的Tmax為6小時，馬西坦為24小時。

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在博萊霉素治療的大鼠中使用附加方案確認Bosentan波生坦最大有效劑量的選擇[3]
使用附加方案證實了最大有效劑量的馬西坦和波生坦的使用：與馬西坦上的賦形劑相比，在馬西坦30 mg/kg的基礎上服用馬西坦30mg/kg不會導致額外的MPAP降低（-18±2和-13±2 mm Hg，p=0.112）。同樣，如圖4所示，與波生坦上的賦形劑相比，當波生坦300 mg/kg達到最大效果時，服用波生坦300mg/kg不會導致額外的MPAP降低（分別為-8±1和-7±1 mm Hg）。

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在博萊霉素治療的大鼠中，使用附加方案對馬西坦和Bosentan/波生坦進行比較[3]
當波生坦300 mg/kg達到最大效果時，博萊霉素大鼠口服馬西坦30 mg/kg，與波生坦300mg/kg上的賦形劑相比，會導致MPAP進一步降低。馬西坦在波生坦上引起的最大降低為-11±1 mm Hg（與賦形劑相比，p<0.01）（圖4）。相反，當達到馬西坦30mg/kg的最大效果時，以300mg/kg的劑量口服波生坦，與在馬西坦30 mg/kg的基礎上服用的賦形劑相比，沒有引起額外的MPAP降低（圖5）。

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無藥物相互作用[3]
如圖6所示，服用波生坦不會改變馬西坦及其活性代謝產(chǎn)物ACT-132577的血漿濃度，排除了波生坦在附加方案中對馬西坦藥代動力學的影響。

臺盼藍排除試驗用于評估細胞的活力。波生坦以推薦濃度（10、20 和 40 μM）添加到人真皮成纖維細胞中。 24 小時和 48 小時后，評估細胞活力。血細胞計數(shù)器用于對染色（死）和未染色（活）細胞進行計數(shù)[2]。

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細胞活力測定[2]
通過臺盼藍排斥試驗評估細胞存活率。用指定濃度的Bosentan/波生坦處理細胞。在24小時和48小時檢查細胞活力。用血細胞計數(shù)器計數(shù)染色（死）和未染色（活）細胞。

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免疫印跡[2]
將匯合的靜止成纖維細胞血清饑餓48小時并收獲。在一些實驗中，細胞在收獲前用ET-1或Bosentan/波生坦刺激指定的時間。如前所述制備全細胞裂解物和核提取物。樣品經(jīng)過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳和用指定的一抗進行免疫印跡。使用增強的化學發(fā)光技術檢測條帶。根據(jù)一系列試點實驗，分別使用核提取物和全細胞裂解物進行免疫印跡時，抗Fli1抗體和抗磷酸Fli1（Thr312）特異性抗體的效果要好得多。

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實時熒光定量PCR評價COL1A2啟動子活性[2]
正常或SSc成纖維細胞在100mm培養(yǎng)皿中生長至50%融合，使用FuGENE6用指定的構建體和pSV-β-半乳糖苷酶（β-GAL）轉(zhuǎn)染。在37°C下孵育過夜后，一些細胞用ET-1或Bosentan/波生坦進一步刺激24小時。收集細胞，使用RT-PCR測定CAT和β-GAL mRNA水平。β-GAL mRNA水平使轉(zhuǎn)染效率正常化。在某些樣本中，已證實該方法再現(xiàn)了使用[14C]-氯霉素進行CAT報告分析的規(guī)范方法評估的相對啟動子活性的結果。引物序列如下：CAT正向5′-TTCCGTCTCAGCACATCCCTGGGTGA-3′和反向5′-CCCATCGGTGAAAACGGGGGCGAA-3′；β-GAL正向5′-TCCACCTTCCCTGGTTA-3′和反向5′-AGAGTCGGGGGGGGGTTTG-3′。

大鼠：采用兩個月齡的DSS和Wistar大鼠。使用0.1至100 mg/kg（馬西替坦）或3至600 mg/kg（波生坦）的劑量，通過單次灌胃給藥，測量其對心率（HR）、平均動脈壓（MAP）或平均肺動脈壓（MPAP）的藥理作用，觀察時間長達120小時。1）首先，在根據(jù)劑量反應曲線確定的波生坦最大有效劑量基礎上，再給予馬西替坦，以評估馬西替坦是否比波生坦具有更強的藥理活性。其次，在馬西替坦最大有效劑量的基礎上，再給予相同劑量的波生坦。第一種受試化合物的Tmax是指第二種化合物達到最大有效劑量的時間點。

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劑量-反應曲線和附加方案[3]
首先，在全身性高血壓DSS大鼠和博來霉素誘導的肺動脈高壓Wistar大鼠中構建每種內(nèi)皮素受體拮抗劑（ERA）的劑量-反應曲線，以確定每種ERA的最大有效劑量和Tmax（觀察到最大效應的時間）。在單次灌胃給藥后120小時內(nèi)，測量平均動脈壓（MAP）或平均肺動脈壓（MPAP）和心率（HR）的藥理學效應，劑量范圍為0.1至100 mg/kg（馬西替坦）或3至600 mg/kg（波生坦）。為了確定馬西替坦是否比波生坦具有更優(yōu)的藥理活性，我們設計了一項研究，其中：1）在根據(jù)圖1所示的劑量-反應曲線確定的最大有效劑量波生坦的基礎上，再給予馬西替坦；2）在最大有效劑量馬西替坦的基礎上，再給予相同劑量的波生坦。第二個化合物的最大有效劑量在第一個受試化合物達到最大濃度（Tmax）時給予。藥代動力學[3]
為了排除任何藥物相互作用對所測藥理效應的干擾，我們在與附加給藥方案相似的條件下，分別在有或無波生坦的情況下，測量了馬西替坦及其活性代謝物ACT-132577的暴露量。在給予馬西替坦 30 mg/kg 前 6 小時，分別給予 Wistar 大鼠（每組 n = 6）賦形劑或波生坦 300 mg/kg。分別于口服馬西替坦后 1、2、3、4、6、8 和 24 小時采集血漿樣本，并采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術測定馬西替坦和 ACT-132577 的定量分析。

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測試化合物[3]
馬西替坦和波生坦由 Actelion Pharmaceuticals Ltd. 提供。以 7.5% 的明膠（5 mL/kg）作為灌胃給藥的賦形劑。

吸收、分布和排泄
絕對生物利用度約為50%，食物不影響吸收。
波生坦經(jīng)肝臟代謝后，通過膽汁排泄。
18 L
4 L/h [肺動脈高壓患者]

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代謝/代謝物
波生坦在肝臟中經(jīng)細胞色素P450酶CYP2C9和CYP3A4（以及可能的CYP2C19）代謝，產(chǎn)生三種代謝物，其中一種Ro 48-5033具有藥理活性，可能貢獻母體化合物總活性的10%至20%。
已知的波生坦人體代謝物包括羥基波生坦和4-叔丁基-N-[6-(2-羥基乙氧基)-5-(2-羥基苯氧基)-[2,2-]聯(lián)嘧啶-4-基]-苯磺酰胺。

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生物半衰期
在健康成年人中，末端消除半衰期約為5小時。

肝毒性
波生坦可導致3%至18%的患者出現(xiàn)血清轉(zhuǎn)氨酶水平升高，超過正常值上限（ULN）三倍，使用目前推薦劑量時平均發(fā)生率為7.6%。酶升高通?？勺孕芯徑?，且很少伴有癥狀，但有時升高幅度較大且持續(xù)存在，需要減少劑量或停藥（3%至4%的患者）。建議每月監(jiān)測血清轉(zhuǎn)氨酶水平，若轉(zhuǎn)氨酶水平超過ULN八倍或持續(xù)超過ULN五倍，則應停藥。另有罕見病例報告顯示，使用波生坦可出現(xiàn)臨床表現(xiàn)明顯的肝損傷，并伴有黃疸。發(fā)病通常在開始使用波生坦后1至6個月內(nèi)，但也曾有長期治療期間出現(xiàn)病例的報道（病例1）。酶譜通常為肝細胞型或混合型。通常不出現(xiàn)免疫過敏癥狀，自身抗體通常不存在或滴度很低。部分病例病情嚴重，并有死亡病例報告，但尚未有已發(fā)表的關于波生坦引起慢性肝炎或膽管消失綜合征的報告。通常不出現(xiàn)自身免疫和免疫過敏癥狀。
可能性評分：C（可能是臨床上明顯的肝損傷的原因）。

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妊娠和哺乳期影響
? 哺乳期用藥概述
一項針對一名哺乳期服用波生坦患者的研究發(fā)現(xiàn)，其乳汁中藥物濃度極低。另一名婦女在服用波生坦和西地那非期間哺乳早產(chǎn)兒，未報告不良反應。嬰兒攝入的劑量遠低于治療嬰兒的劑量，預計不會對母乳喂養(yǎng)的嬰兒造成任何不良影響。
? 對母乳喂養(yǎng)嬰兒的影響
一名23歲患有先天性心臟病和肺動脈高壓的女性在懷孕期間接受了波生坦和西地那非治療，劑量不詳。產(chǎn)后繼續(xù)服用這些藥物和華法林。她的嬰兒在妊娠30周時通過剖腹產(chǎn)分娩，出生體重1.41公斤。據(jù)作者所述，她在新生兒重癥監(jiān)護室哺乳了11周，“結果良好”，但嬰兒在妊娠26周時死于呼吸道合胞病毒感染。[2]
一名正在哺乳其21個月大嬰兒的女性，每天服用3次20毫克西地那非和每天2次125毫克波生坦來治療肺動脈高壓。藥物在產(chǎn)后6個月以上開始使用。母親未報告從出生到產(chǎn)后第651天期間嬰兒出現(xiàn)任何可能的不良反應、嚴重健康問題或住院情況，在此期間嬰兒仍接受部分母乳喂養(yǎng)。[1]
? 對哺乳和母乳的影響
截至修訂日期，未找到相關的已發(fā)表信息。

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蛋白結合
與血漿蛋白（主要是白蛋白）的結合率大于98%。

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毒性概述
波生坦耐受性良好，在患者接受適當監(jiān)測的情況下，毒性風險極低。然而，當與環(huán)孢素A合用時，波生坦的血漿濃度升高了30倍，導致嚴重的頭痛、惡心和嘔吐。但這些患者未出現(xiàn)嚴重的不良反應或毒性。在上市后監(jiān)測期間，一名男性患者服用10000毫克波生坦后出現(xiàn)過量用藥，導致惡心、嘔吐、低血壓、視力模糊和出汗。經(jīng)充分的血壓支持治療后，患者完全康復。

[1]. Bosentan: a review of its use in the management of mildly symptomatic pulmonary arterial hypertension. Am J Cardiovasc Drugs. 2009;9(5):331-50.

[2]. Bosentan reverses the pro-fibrotic phenotype of systemic sclerosis dermal fibroblasts via increasing DNA binding ability of transcription factor Fli1. Arthritis Res Ther. 2014 Apr 3;16(2):R86.

[3]. Comparison of pharmacological activity of macitentan and bosentan in preclinical models of systemic and pulmonary hypertension. Life Sci. 2014 Nov 24;118(2):333-9.

[4]. Endothelin Regulates Porphyromonas gingivalis-Induced Production of Inflammatory Cytokines. PLoS One. 2016 Dec 28;11(12):e0167713.

波生坦是一種磺胺類藥物，屬于嘧啶類和伯醇類。它是一種抗高血壓藥和內(nèi)皮素受體拮抗劑。
波生坦是一種雙重內(nèi)皮素受體拮抗劑，由Actelion Pharmaceuticals公司以商品名Tracleer上市銷售。波生坦通過阻斷內(nèi)皮素分子的作用來治療肺動脈高壓，內(nèi)皮素分子原本會促進血管收縮并導致高血壓。
無水波生坦是一種內(nèi)皮素受體拮抗劑。無水波生坦的作用機制是作為內(nèi)皮素受體拮抗劑、細胞色素P450 3A誘導劑和細胞色素P450 2C9誘導劑。
波生坦是一種內(nèi)皮素受體拮抗劑，用于治療肺動脈高壓（PAH）。波生坦治療期間曾出現(xiàn)血清酶升高，并偶見臨床表現(xiàn)明顯的急性肝損傷。
波生坦是一種磺胺類藥物衍生的競爭性特異性內(nèi)皮素受體拮抗劑，其對內(nèi)皮素A受體的親和力略高于內(nèi)皮素B受體。波生坦通過與內(nèi)皮細胞和血管平滑肌中的內(nèi)皮素A和內(nèi)皮素B受體結合，阻斷內(nèi)皮素1（一種強效的內(nèi)源性血管收縮劑和支氣管收縮劑）的作用。波生坦可降低肺血管阻力和全身血管阻力，尤其用于治療肺動脈高壓。
一種磺胺類和嘧啶類衍生物，作為雙重內(nèi)皮素受體拮抗劑，用于治療肺動脈高壓和系統(tǒng)性硬化癥。

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藥物適應癥
用于治療肺動脈高壓 (PAH)，以改善運動能力并降低臨床惡化速度（適用于 WHO III 級或 IV 級癥狀的患者）。
FDA 標簽
用于治療 WHO 功能分級 III 級的肺動脈高壓 (PAH)，以改善患者的運動能力和癥狀。已證實對以下情況有效：，，，原發(fā)性（特發(fā)性和家族性）PAH；，繼發(fā)于硬皮病且無明顯間質(zhì)性肺疾病的 PAH；與先天性體肺分流和艾森門格綜合征相關的肺動脈高壓 (PAH)。在 WHO 功能分級 II 級的 PAH 患者中也顯示出一些改善。Tracleer 還適用于減少系統(tǒng)性硬化癥合并持續(xù)性指端潰瘍患者的新發(fā)指端潰瘍數(shù)量。用于治療肺動脈高壓 (PAH)，以改善世界衛(wèi)生組織 (WHO) 功能分級 III 級患者的運動能力和癥狀。已證實對以下情況有效：原發(fā)性（特發(fā)性和家族性）PAH；繼發(fā)于硬皮病且無明顯間質(zhì)性肺疾病的 PAH；與先天性體肺分流和艾森門格綜合征相關的 PAH。在 WHO 功能分級 II 級的 PAH 患者中也顯示出一些改善。 Stayveer 還適用于減少系統(tǒng)性硬化癥合并持續(xù)性指端潰瘍患者新發(fā)指端潰瘍的數(shù)量。
治療間質(zhì)性肺纖維化、治療肺動脈高壓、治療系統(tǒng)性硬化癥

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作用機制
內(nèi)皮素-1 (ET-1) 是一種神經(jīng)激素，其作用是通過與內(nèi)皮細胞和血管平滑肌中的 ET_A 和 ET_B 受體結合介導的。它對 ET_A 受體的親和力略高于 ET_B 受體。肺動脈高壓患者的血漿和肺組織中 ET-1 濃度升高，提示 ET-1 在該疾病的發(fā)病機制中發(fā)揮作用。波生坦是內(nèi)皮素受體ET_A和ET_B的特異性競爭性拮抗劑。

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藥效學
波生坦屬于內(nèi)皮素受體拮抗劑（ERA）類藥物。肺動脈高壓（PAH）患者的血漿和肺組織中內(nèi)皮素水平升高，內(nèi)皮素是一種強效的血管收縮劑。波生坦可阻斷內(nèi)皮素與其受體的結合，從而消除內(nèi)皮素的有害作用。

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波生坦（Tracleer）是一種口服的雙重內(nèi)皮素-1（ET-1）受體拮抗劑，獲準用于治療WHO II級（輕度癥狀性）肺動脈高壓（PAH）患者?？诜ㄉ怪委煂p度癥狀性PAH患者有益，且通常耐受性良好。在一項設計良好的安慰劑對照試驗中，研究人員對輕度癥狀性肺動脈高壓（PAH）的青少年和成人患者進行了研究，結果顯示，與安慰劑相比，波生坦顯著降低了肺血管阻力，但6分鐘步行距離并未顯著增加。同樣，在一項小型非對照試驗中，波生坦也使兒童患者（其中大多數(shù)患有輕度癥狀性PAH）的血流動力學指標有所改善，但運動能力并未顯著提高。波生坦的不良反應與其他適應癥中觀察到的不良反應一致，主要關注點是潛在的致畸性和肝毒性，因此建議定期監(jiān)測肝功能?？傮w而言，考慮到PAH的進展性，波生坦為輕度癥狀性PAH患者提供了更多治療選擇。 [1]

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引言：盡管系統(tǒng)性硬化癥（SSc）的發(fā)病機制仍不甚明了，但近期研究表明，內(nèi)皮素在SSc相關的纖維化和血管病變發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，而雙重內(nèi)皮素受體拮抗劑波生坦有望成為該疾病的疾病修飾藥物。重要的是，內(nèi)皮素-1（ET-1）對正常真皮成纖維細胞具有促纖維化作用，而波生坦能夠逆轉(zhuǎn)SSc真皮成纖維細胞的促纖維化表型。本研究旨在闡明ET-1和波生坦對真皮成纖維細胞作用的分子機制，這些機制目前尚未得到充分研究。方法：分別采用逆轉(zhuǎn)錄實時PCR和免疫印跡法檢測靶基因的mRNA水平以及靶蛋白的表達和磷酸化水平。采用人α2(I)型膠原(COL1A2)啟動子序列缺失進行啟動子分析。利用DNA親和沉淀和染色質(zhì)免疫沉淀技術評估Fli1的DNA結合能力。通過免疫染色評估小鼠皮膚中Fli1蛋白的表達水平。結果：在正常成纖維細胞中，ET-1激活c-Abl和蛋白激酶C (PKC)-δ，并誘導Fli1在蘇氨酸312位點磷酸化，導致Fli1（COL1A2基因的強效抑制因子）的DNA結合能力下降，以及I型膠原表達增加。另一方面，波生坦降低了c-Abl和PKC-δ的表達、PKC-δ的核定位以及Fli1的磷酸化水平，導致Fli1的DNA結合能力增強，并抑制系統(tǒng)性硬化癥(SSc)成纖維細胞中I型膠原的表達。在博來霉素處理的小鼠中，波生坦可預防真皮纖維化并增加病變真皮成纖維細胞中 Fli1 的表達。結論：ET-1 通過激活“c-Abl - PKC-δ - Fli1”通路，對正常成纖維細胞發(fā)揮強效的促纖維化作用。波生坦通過阻斷該信號通路，逆轉(zhuǎn)系統(tǒng)性硬化癥 (SSc) 成纖維細胞的促纖維化表型，并預防博來霉素處理小鼠真皮纖維化的發(fā)生。盡管波生坦治療 SSc 真皮和肺纖維化的療效有限，但本研究結果無疑為我們進一步探索即將推出的新型雙重內(nèi)皮素受體拮抗劑作為 SSc 疾病修飾藥物的潛力提供了有用的線索。[2]

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目的：內(nèi)皮素 (ET) 系統(tǒng)是一個組織系統(tǒng)，因為 ET 同工酶的產(chǎn)生主要為自分泌或旁分泌。馬西替坦是一種新型的雙重 ETA/ETB 受體拮抗劑，具有增強的組織分布和持續(xù)的受體結合特性，旨在實現(xiàn)更有效的 ET 受體阻斷。為了確定這些特性是否能轉(zhuǎn)化為體內(nèi)療效的提高，我們設計了一項研究，將患有全身性或肺動脈高壓并佩戴遙測裝置的大鼠，在給予最大有效劑量的另一種雙重ETA/ETB受體拮抗劑波生坦（其不具有持續(xù)的受體占有率，且組織分布較少）的基礎上，再給予馬西替坦。主要方法：在清醒的、對鹽敏感的Dahl高血壓大鼠和經(jīng)博來霉素治療的肺動脈高壓大鼠中建立兩種化合物的劑量反應曲線后，在給予最大有效劑量的波生坦的基礎上，再給予馬西替坦。主要結果：在高血壓大鼠中，在給予100 mg/kg波生坦的基礎上，再給予30 mg/kg馬西替坦，可使平均動脈壓（MAP）進一步降低19 mmHg（n=9，與溶劑對照組相比，p<0.01）。相反，在給予馬西替坦的基礎上再給予波生坦，未能引起MAP的進一步降低。在肺動脈高壓大鼠模型中，在波生坦的基礎上加用馬西替坦30 mg/kg可使平均肺動脈壓（MPAP）進一步降低4 mmHg（n=8，與溶媒組相比p<0.01），而加用最大有效劑量的波生坦則未引起MPAP的進一步降低。意義：在兩種病理模型中，馬西替坦與波生坦聯(lián)合用藥的附加效應證實，這種新型化合物能夠更有效地阻斷內(nèi)皮素受體，并為其更高的最大療效提供了證據(jù)。[3]

C27H29N5O6S

551.61

551.183

C, 58.79; H, 5.30; N, 12.70; O, 17.40; S, 5.81

147536-97-8

Bosentan-d4; 1065472-77-6; Bosentan hydrate; 157212-55-0

104865

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

742.3±70.0 °C at 760 mmHg

171-175 °C(lit.)

402.8±35.7 °C

0.0±2.6 mmHg at 25°C

1.607

1.15

154.03

2

11

11

39

839

0

O=S(NC1=NC(C2=NC=CC=N2)=NC(OCCO)=C1OC3=CC=CC=C3OC)(C4=CC=C(C(C)(C)C)C=C4)=O

GJPICJJJRGTNOD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H29N5O6S/c1-27(2,3)18-10-12-19(13-11-18)39(34,35)32-23-22(38-21-9-6-5-8-20(21)36-4)26(37-17-16-33)31-25(30-23)24-28-14-7-15-29-24/h5-15,33H,16-17H2,1-4H3,(H,30,31,32)

4-tert-butyl-N-[6-(2-hydroxyethoxy)-5-(2-methoxyphenoxy)-2-pyrimidin-2-ylpyrimidin-4-yl]benzenesulfonamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (4.99 mM) (飽和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (這些助溶劑從左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理鹽水的制備：將 0.9 g 氯化鈉溶解在 100 mL ddH?O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (4.99 mM) (飽和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (這些助溶劑從左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理鹽水溶液的制備（4°C，1 周）：將 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理鹽水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.53 mM) (飽和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (這些助溶劑從左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制備1 mL的工作液，可將 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO儲備液加入到400 μL PEG300中，混勻；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混勻；加入450 μL生理鹽水定容至1 mL。
*生理鹽水的制備：將 0.9 g 氯化鈉溶解在 100 mL ddH?O中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.53 mM) (飽和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (這些助溶劑從左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制備1 mL的工作液，可將100μL 25.0mg/mL澄清的DMSO儲備液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理鹽水中，混勻。
*20% SBE-β-CD 生理鹽水溶液的制備（4°C，1 周）：將 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理鹽水中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.53 mM) (飽和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (這些助溶劑從左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制備1 mL的工作液，可將100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 儲備液加入900 μL 玉米油中，混合均勻。

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請根據(jù)您的實驗動物和給藥方式選擇適當?shù)娜芙馀浞?方案：
1、請先配制澄清的儲備液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(儲備液));
2、取適量母液，按從左到右的順序依次添加助溶劑，澄清后再加入下一助溶劑。以 下列配方為例說明 (注意此配方只用于說明，并不一定代表此產(chǎn)品 的實際溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假設最終工作液的體積為 1 mL, 濃度為5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 儲備液加到 400 μL PEG300 中，混合均勻/澄清；向上述體系中加入50 μL Tween-80，混合均勻/澄清；然后繼續(xù)加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶劑前顯示的百分比是指該溶劑在最終溶液/工作液中的體積所占比例;
4、 如產(chǎn)品在配制過程中出現(xiàn)沉淀/析出，可通過加熱(≤50℃)或超聲的方式助溶;
5、為保證最佳實驗結果，工作液請現(xiàn)配現(xiàn)用！
6、如不確定怎么將母液配置成體內(nèi)動物實驗的工作液，請查看說明書或聯(lián)系我們;
7、 以上所有助溶劑都可在 Invivochem.cn網(wǎng)站購買。