50262-67-4
50262-67-4 結(jié)構(gòu)式
物理化學(xué)性質(zhì)
熔點(diǎn)39-41°C
沸點(diǎn)176-179°C 2mm
閃點(diǎn)176-179°C/2mm
水溶解性Insoluble in water.
BRN4232321
安全數(shù)據(jù)
危險(xiǎn)性描述H302-H312-H331
防范說(shuō)明P261-P280h-P304+P340-P311a-P405-P501a
危險(xiǎn)類(lèi)別碼20/21/22
危險(xiǎn)品運(yùn)輸編號(hào)2811
危險(xiǎn)等級(jí)6.1
包裝類(lèi)別III
安全說(shuō)明GC法
(1)色譜條件 色譜柱：載體，Chromsorb W-HP (80～100目);固定液，3%FFAP(聚乙二醇2mol/L和2-硝基苯甲酸的反應(yīng)物);(2m×2mm)不銹鋼柱;柱溫：158℃;進(jìn)樣器溫度;200℃;檢測(cè)器：FID;載氣：N2流速30ml/min;H2流速0.6ml/min;空氣壓力：49.03kPa。
(2)對(duì)照品及內(nèi)標(biāo)溶液的配制 精密稱取對(duì)照品11.11mg，置于1ml量瓶中，加氯仿溶解，制成標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液。另精密稱取二十三烷5.7mg，置1ml量瓶中，加氯仿至刻度，為內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。
(3)校正因子測(cè)定 用100μl微量注射器吸取標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液160μl置于1ml量瓶中，再于量瓶中加入100μl內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，加氯仿至刻度，混勻，取1μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，用峰面積計(jì)算校正因子。
(4)樣品溶液的制備 取土木香藥材粉末約1g，精密稱定，置具塞瓶中，準(zhǔn)確加入氯仿3ml，冷浸過(guò)夜，取濾液適量，加內(nèi)標(biāo)溶液120μl，氯仿定容至1ml，作為樣品溶液。
(5)測(cè)定 吸取樣品溶液1μl，注入氣相色譜儀，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算藥材中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的百分含量。
(6) 色譜圖
圖1 對(duì)照品及內(nèi)標(biāo)物的氣相色譜圖
1.內(nèi)標(biāo)物，tR=6min; 2.土木香內(nèi)酯，tR=13min; 3.異土木香內(nèi)酯，tR=19min
【對(duì)多發(fā)性骨髓瘤 RPMI-8226 細(xì)胞增殖、凋亡的影響】[2]
使用濃度為 1、2． 5、5、7． 5 及 10 μmol/L 的土木香內(nèi)酯處理 RPMI-8226 細(xì)胞 48 h，應(yīng)用 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力，并計(jì)算其半數(shù)抑制濃度( IC50) 值; 使用濃度為 2． 5，5 及 7． 5 μmol/L 的土木香內(nèi)酯處理 RPMI-8226細(xì)胞 48 h 后，應(yīng)用 Annexin V/PI 雙標(biāo)記法分析細(xì)胞凋亡; Western blot 方法檢測(cè)呈切割的 caspase-3 及 ERK 信號(hào)通路的變化; 裸鼠荷瘤并給予土木香內(nèi)酯以進(jìn)一步驗(yàn)證其對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的促凋亡作用。發(fā)現(xiàn)土木香內(nèi)酯可抑制 RPMI-8226 細(xì)胞活力，并呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng)( r = － 0． 9784，P = 0． 0007) ; RPMI-8226 細(xì)胞 48 h 的 IC50為 4． 32 ±0. 15 μmol / L; 流式細(xì)胞術(shù)分析凋亡結(jié)果顯示，隨著土木香內(nèi)酯濃度的增高，細(xì)胞早期凋亡率顯著增加( r = 0． 9601，P＜ 0． 05) ; Western blot 結(jié)果顯示，土木香內(nèi)酯處理 RPMI-8226 細(xì)胞后，活化了 caspase-3，降低 ERK 磷酸化水平; 體內(nèi)結(jié)果顯示，給藥組小鼠瘤體積明顯小于對(duì)照組( P ＜ 0． 05) ; 免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組瘤內(nèi)細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原 Ki67 及 p-ERK 的水平降低。結(jié)論: 土木香內(nèi)酯可有效地抑制多發(fā)性骨髓瘤 RPMI-8226 細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡，其機(jī)制可能是通過(guò)抑制 ERK 信號(hào)通路的活性，抑制裸鼠皮下多發(fā)性骨髓瘤的生長(zhǎng)。
已有研究發(fā)現(xiàn)，土木香內(nèi)酯具有多種抗腫瘤的效果。本研究選擇多發(fā)性骨髓瘤 RPMI-8226 細(xì)胞作為研究對(duì)象，通過(guò)體外和體內(nèi)兩方面研究土木香內(nèi)酯對(duì)多發(fā)性骨髓瘤的抗腫瘤作用。首先應(yīng)用CCK-8 檢測(cè)土木香內(nèi)酯對(duì) RPMI-8226 細(xì)胞的殺傷作用，發(fā)現(xiàn)其可以顯著的抑制骨髓瘤的細(xì)胞活性，48 hIC50為 4． 32 ± 0． 15 μmol/L。此前，Mi 等報(bào)道人正常干細(xì)胞株 L02 對(duì)土木香內(nèi)酯較不敏感，其 IC50約為 31． 34 μg /ml( 133．75 μmol/L) 。由此可見(jiàn)，土木香內(nèi)酯對(duì)正常細(xì)胞殺傷力較低，而在較低的濃度下對(duì)骨髓瘤細(xì)胞殺傷效果明顯。進(jìn)一步的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)土木香內(nèi)酯處理骨髓瘤細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，土木香內(nèi)酯通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)揮抗骨髓瘤的作用。
(1)色譜條件 色譜柱：載體，Chromsorb W-HP (80～100目);固定液，3%FFAP(聚乙二醇2mol/L和2-硝基苯甲酸的反應(yīng)物);(2m×2mm)不銹鋼柱;柱溫：158℃;進(jìn)樣器溫度;200℃;檢測(cè)器：FID;載氣：N2流速30ml/min;H2流速0.6ml/min;空氣壓力：49.03kPa。
(2)對(duì)照品及內(nèi)標(biāo)溶液的配制 精密稱取對(duì)照品11.11mg，置于1ml量瓶中，加氯仿溶解，制成標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液。另精密稱取二十三烷5.7mg，置1ml量瓶中，加氯仿至刻度，為內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。
(3)校正因子測(cè)定 用100μl微量注射器吸取標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液160μl置于1ml量瓶中，再于量瓶中加入100μl內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，加氯仿至刻度，混勻，取1μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，用峰面積計(jì)算校正因子。
(4)樣品溶液的制備 取土木香藥材粉末約1g，精密稱定，置具塞瓶中，準(zhǔn)確加入氯仿3ml，冷浸過(guò)夜，取濾液適量，加內(nèi)標(biāo)溶液120μl，氯仿定容至1ml，作為樣品溶液。
(5)測(cè)定 吸取樣品溶液1μl，注入氣相色譜儀，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算藥材中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的百分含量。
(6) 色譜圖
圖1 對(duì)照品及內(nèi)標(biāo)物的氣相色譜圖
1.內(nèi)標(biāo)物，tR=6min; 2.土木香內(nèi)酯，tR=13min; 3.異土木香內(nèi)酯，tR=19min
【對(duì)多發(fā)性骨髓瘤 RPMI-8226 細(xì)胞增殖、凋亡的影響】[2]
使用濃度為 1、2． 5、5、7． 5 及 10 μmol/L 的土木香內(nèi)酯處理 RPMI-8226 細(xì)胞 48 h，應(yīng)用 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力，并計(jì)算其半數(shù)抑制濃度( IC50) 值; 使用濃度為 2． 5，5 及 7． 5 μmol/L 的土木香內(nèi)酯處理 RPMI-8226細(xì)胞 48 h 后，應(yīng)用 Annexin V/PI 雙標(biāo)記法分析細(xì)胞凋亡; Western blot 方法檢測(cè)呈切割的 caspase-3 及 ERK 信號(hào)通路的變化; 裸鼠荷瘤并給予土木香內(nèi)酯以進(jìn)一步驗(yàn)證其對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的促凋亡作用。發(fā)現(xiàn)土木香內(nèi)酯可抑制 RPMI-8226 細(xì)胞活力，并呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng)( r = － 0． 9784，P = 0． 0007) ; RPMI-8226 細(xì)胞 48 h 的 IC50為 4． 32 ±0. 15 μmol / L; 流式細(xì)胞術(shù)分析凋亡結(jié)果顯示，隨著土木香內(nèi)酯濃度的增高，細(xì)胞早期凋亡率顯著增加( r = 0． 9601，P＜ 0． 05) ; Western blot 結(jié)果顯示，土木香內(nèi)酯處理 RPMI-8226 細(xì)胞后，活化了 caspase-3，降低 ERK 磷酸化水平; 體內(nèi)結(jié)果顯示，給藥組小鼠瘤體積明顯小于對(duì)照組( P ＜ 0． 05) ; 免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組瘤內(nèi)細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原 Ki67 及 p-ERK 的水平降低。結(jié)論: 土木香內(nèi)酯可有效地抑制多發(fā)性骨髓瘤 RPMI-8226 細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡，其機(jī)制可能是通過(guò)抑制 ERK 信號(hào)通路的活性，抑制裸鼠皮下多發(fā)性骨髓瘤的生長(zhǎng)。
已有研究發(fā)現(xiàn)，土木香內(nèi)酯具有多種抗腫瘤的效果。本研究選擇多發(fā)性骨髓瘤 RPMI-8226 細(xì)胞作為研究對(duì)象，通過(guò)體外和體內(nèi)兩方面研究土木香內(nèi)酯對(duì)多發(fā)性骨髓瘤的抗腫瘤作用。首先應(yīng)用CCK-8 檢測(cè)土木香內(nèi)酯對(duì) RPMI-8226 細(xì)胞的殺傷作用，發(fā)現(xiàn)其可以顯著的抑制骨髓瘤的細(xì)胞活性，48 hIC50為 4． 32 ± 0． 15 μmol/L。此前，Mi 等報(bào)道人正常干細(xì)胞株 L02 對(duì)土木香內(nèi)酯較不敏感，其 IC50約為 31． 34 μg /ml( 133．75 μmol/L) 。由此可見(jiàn)，土木香內(nèi)酯對(duì)正常細(xì)胞殺傷力較低，而在較低的濃度下對(duì)骨髓瘤細(xì)胞殺傷效果明顯。進(jìn)一步的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)土木香內(nèi)酯處理骨髓瘤細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，土木香內(nèi)酯通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)揮抗骨髓瘤的作用。