背景及概述[1]
靶向藥，AZD3759，是一款專(zhuān)門(mén)針對(duì)攜帶EGFR突變、合并腦轉(zhuǎn)移的晚期肺癌患者而開(kāi)發(fā)的“大殺器”。最近一年多來(lái)，陸陸續(xù)續(xù)公布過(guò)該藥物的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以及小規(guī)模非正式臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)。近日，《LancetRespirMed》雜志次正式發(fā)布了該藥物多中心、I期臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)。從2014年11月到2016年9月，在美國(guó)、澳大利亞、韓國(guó)以及臺(tái)灣的11家醫(yī)院一共招募了67名志愿者，接受了該藥物治療。其中，29名患者入組的是劑量探索隊(duì)列（也就是分別接受不同濃度的藥物，摸索最合適的劑量），另外38名患者入組的是劑量拓展隊(duì)列（劑量已經(jīng)在前面的摸索期敲定了，目的是初步驗(yàn)證療效）。截止到2016年12月12號(hào)，依然有23名患者疾病穩(wěn)定，一直在接受AZD3759的治療。在劑量探索階段，500mg每天2次組有兩位患者出現(xiàn)了嚴(yán)重的副作用（皮疹和粘膜炎）。因此，研究者判斷200mg或者300mg每天2次，是更合適的劑量。200或300mg每天2次，最主要的副作用是皮疹、腹瀉、肝功能異常等，一般都可以控制和處理；3級(jí)不良反應(yīng)發(fā)生率低于20%，未出現(xiàn)4級(jí)不良反應(yīng)。
制備[1]
步驟1：5-羥基-4-甲氧基-2-硝基苯甲酸
將4，5-二甲氧基-2-硝基苯甲酸(145g，0.639mol)溶于氫氧化鈉溶液(6N，600mL)中并且在100℃下加熱3h。將該混合物冷卻至室溫，并且將其傾倒進(jìn)濃鹽酸和碎冰的混合物(pH＜2)中。將該混合物過(guò)濾，并且將濾餅干燥，以給出呈黃色固體的步驟1(149g，粗品)，該物質(zhì)直接使用無(wú)需進(jìn)一步純化。1HNMR(DMSO-d6400MHz)：δ7.34(s，1H)，6.89(s，1H)，3.80(s，3H)。
步驟2：2-氨基-5-羥基-4-甲氧苯甲酸
在室溫下，在H2氣氛(50psi)下，將MeOH(1.2L)中的步驟1(50g，93.85mmol)和10％Pd/C(5g)的混合物攪拌4h。將該混合物過(guò)濾并且用MeOH(10×1L)洗滌。將合并的MeOH提取物濃縮，以給出呈黑色固體的步驟2(27.7g，64％收率)，該物質(zhì)直接使用無(wú)需進(jìn)一步純化。
步驟3：7-甲氧基喹唑啉-4，6-二醇
向在2-甲氧乙醇(2L)中的步驟2(88g，0.48mol)的懸浮液中添加甲脒(101g，0.96mol)并且將該反應(yīng)混合物回流過(guò)夜。將該反應(yīng)混合物濃縮，用水(1.5L)稀釋并用氨水中和(至pH＝7)。將該混合物過(guò)濾并且將沉淀物用水洗滌。將沉淀物在減壓下干燥，以給出呈棕色固體的步驟3(62g，67％收率)。1HNMR(DMSO-d6400MHz)：δ7.89(s，1H)，7.36(s，1H)，7.08(s，1H)，3.88(s，3H)。
步驟4：4-羥基-7-甲氧基喹唑啉-6-基乙酸鹽
向在無(wú)水DCM(1L)中的步驟3(52g，0.27mol)和吡啶(53.6g，0.68mol)的懸液液中滴加乙酰氯(52.9g，0.68mol)并且將該混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將該混合物傾倒進(jìn)水(1L)中并且用DCM萃取若干次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，濃縮，以給出呈黑色固體的步驟4(63.2g，100％收率)。1HNMR(DMSO-d6400MHz)：δ8.62(s，1H)，7.88(s，1H)，7.37(s，1H)，3.95(s，3H)，2.74(s，3H)。
步驟5：4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-基乙酸鹽
將在POCl3(287mL)中的步驟4(75.6g，0.323mol)的懸液液加熱至回流、持續(xù)0.5h。將該反應(yīng)混合物濃縮并且用DCM(500mL)稀釋?zhuān)瑑A倒進(jìn)水(500mL)中，過(guò)濾并且用DCM洗滌。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥并濃縮。通過(guò)色譜法(PE/EtOAc＝1/1)純化，給出呈白色固體的步驟5(55g，67％收率)。1HNMR(CDCl3400MHz)：δ8.95(s，1H)，7.90(s，1H)，7.43(s，1H)，4.02(s，1H)，2.39(s，1H)。
步驟6：4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基乙酸鹽
向在乙腈(4L)中的步驟5(100g，0.396mol)的懸浮液中添加2-氟-3-氯苯胺(60.5g，0.416mol)并且將該反應(yīng)混合物加熱至80℃過(guò)夜。通過(guò)過(guò)濾收集沉淀物并且在真空中干燥，以給出呈白色固體的步驟6(181g，80％純度)，該物質(zhì)直接用于下一步而無(wú)需純化。1HNMR(DMSO-d6400MHz)：δ8.93(s，1H)，8.82(s，1H)，7.67-7.63(m，1H)，7.59(s，1H)，7.56-7.52(m，1H)，7.39-7.35(m，1H)，4.02(s，3H)，2.39(s，3H)。
步驟7：4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-醇
向在MeOH(2L)中的步驟6(181g，0.396mol)的溶液中添加碳酸鉀(138g，1mol)并且將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將該混合物過(guò)濾并且將固體用MeOH洗滌。將濾液在真空中濃縮，已給出步驟7(280g，60％純度，含有碳酸鉀)。1HNMR(DMSO-d6400MHz)：δ8.01(s，1H)，7.61-7.58(m，1H)，7.27-7.24(m，1H)，7.17-7.13(m，1H)，6.95(s，1H)，6.83(s，1H)，3.79(s，3H)。
步驟8：叔丁基(3R)-4-(氯羰基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸酯
在0℃下，向在無(wú)水DCM(250mL)中的三光氣(23g，75mmol)的混合物中滴加吡啶(18g，225mmol)，隨后添加叔丁基(3R)-3-甲基哌嗪-1-羧酸酯(15g，75mmol)。將該混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。TLC顯示起始材料已經(jīng)被消耗。將該混合物濃縮，以給出呈黃色固體的中間體8，該物質(zhì)直接使用無(wú)需進(jìn)一步純化。
步驟9：4-叔丁基1-{4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}(2R)-2-甲基哌嗪-1，4-二羧酸酯
將在無(wú)水DMF(300mL)中的根據(jù)以上程序制備的步驟7(19.2g，60mmol)、步驟8和碳酸鉀(16.6g，120mmol)的混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將該反應(yīng)混合物傾倒進(jìn)水(250mL)中并過(guò)濾，并且將濾餅在真空下干燥，以給出呈黃色固體的步驟9(25g，75％收率)。HPLC：在10-80AB_6min色譜中tR＝2.68min(UltimateXB-C18，3.0*50mm，3um)。LCMS：在5-95AB_1.5min色譜中tR＝0.792min(WelchXtimateC18，2.1*30mm，3um)，MS(ESI)m/z546.0[M+H]+。
步驟10：4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基(2R)-2-甲基哌嗪-1-羧酸酯
在室溫下，將在DCM(100mL)和HCl/二氧六環(huán)(10mL，4M)中的步驟9(8.3g，15mmol)的混合物攪拌30min。在過(guò)濾之后，收集固體并且將其再溶解于水中，并且然后用飽和NaHCO3調(diào)節(jié)至pH＝8。收集沉淀物并且將其用CH2Cl2洗滌。將該固體在真空下干燥，以給出呈黃色固體的步驟10(8g，85％純度)。該粗產(chǎn)物用于下一步而無(wú)需純化。
步驟11：AZD3759
向在MeOH(100mL)中的步驟10(8g，15mmol，85％純度)和多聚甲醛(1g，32mmol)的混合物中添加氰基硼氫化鈉(2g，32mmol)并且將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將該反應(yīng)混合物在真空中濃縮，將殘余物用水稀釋并且用EtOAc(3x100mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥并且在減壓下濃縮。通過(guò)反相制備型HPLC(柱：synergi77*250，10um，梯度：5-35％B(A＝水/0.05％甲酸，B＝乙腈)，流速：140mL/min)純化粗產(chǎn)物。用飽和碳酸鉀中和被包含在所希望的產(chǎn)物中的部分并且將其用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)層在真空中濃縮并凍干，以給出呈白色固體的實(shí)例1(4g，2個(gè)步驟的收率是58％)。
LC-MS：在4min色譜中tR＝1.406min，MS(ESI)m/z460.0[M+H]+SFC：在3min色譜中tR＝1.637min(ChiralpakAD-350*4.6mmI.D，3um)，MS(ESI)m/z460.1[M+H]+
1HNMR(CDCl3400MHz)：δ8.76(s，1H)，8.53-8.48(m，1H)，7.65(s，1H)，7.44(brs，1H)，7.34(s，1H)，7.19-7.15(m，2H)，4.51-4.50(m，1H)，4.20-4.05(m，1H)，3.99(s，3H)，3.50-3.30(m，1H)，2.87(d，1H)，2.73(d，1H)，2.35(s，3H)，2.35-2.25(m，1H)，2.13-2.11(m，1H)，1.47(s，3H)。
步驟12：AZD3759鹽酸鹽
將步驟1(1.8g)溶解于乙腈(5mL)中，然后緩慢添加1NHCl(5mL)，通過(guò)凍干將該溶液干燥，以給出呈黃色固體的實(shí)例2(1.93g)。LC-MS：在4min色譜中tR＝1.355min，MS(ESI)m/z460.1[M+H]+。SFC：在3min色譜中tR＝1.773min(ChiralpakAD-350*4.6mmI.D，3um)，MS(ESI)m/z460.1[M+H]+。1HNMR(CD3OD400MHz)：δ8.55(s，1H)，8.33-8.16(m，1H)，7.56(t，1H)，7.45(t，1H)，7.33(s，1H)，7.28-7.20(m，1H)，4.81-4.59(m，1H)，4.52-4.15(m，1H)，4.10-3.95(m，3H)，3.74-3.48(m，3H)，3.35(br.s.，1H)，3.24-3.09(m，1H)，2.97(s，3H)，1.54(br.s.，3H)。[α]D25＝-14.96(c10，DMSO)
主要參考資料
[1]CN201480012092.3表皮生長(zhǎng)因子受體的活化突變形式的喹唑啉抑制劑