人抗心磷脂抗體IGM(ACA-IGM)ELISA試劑盒概述^[1][2]

人抗心磷脂抗體IGM(ACA-IGM)ELISA試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標本中人抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)的存在與否。

人抗心磷脂抗體IGM(ACA-IGM)ELISA試劑盒樣本處理及要求^[1][2]

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

主要參考文獻

[1] 沈洪遠；張健；胡志剛；葉燕。Sm3+標記抗心磷脂抗體IgM時間分辨熒光免疫分析法的建立。中國實驗診斷學(xué)。

[2] 盛慧明；曹雅楠；孫兵；薛一峰；胡志剛?？剐牧字贵wIgG和IgM雙標記時間分辨熒光免疫分析法的建立和應(yīng)用。上海醫(yī)學(xué)。