概述^[1]

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞血清型程序凍存液針對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凍存的特殊配方，能大大降低細(xì)胞在凍存過(guò)程中冰晶對(duì)于細(xì)胞的損傷，有效提高細(xì)胞復(fù)蘇率和活力。質(zhì)量控制：經(jīng)過(guò)了細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)。保存：保存于2-8°C，有效期維持三年；為了維持產(chǎn)品穩(wěn)定性，請(qǐng)勿反復(fù)凍融相關(guān)產(chǎn)品。

特點(diǎn)^[1]

即用型產(chǎn)品，方便快捷；

復(fù)蘇率更高達(dá) 90%，遠(yuǎn)超普通凍存液的70%的效率；

無(wú)需程序凍存，細(xì)胞可直接置于- 80°C冰箱完成凍存過(guò)程，省事省時(shí)；

無(wú)血清無(wú)蛋白配方，成分明確，不影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化潛能及其它高級(jí)應(yīng)用；

凍存步驟^[1]

1. 選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，按照常用的方法收集細(xì)胞于離心管中，按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)（參考數(shù)量：5×105 至 5×106cells/mL）。

2. 取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（考離心條件：4℃，250 g，離心3~5 min）。

3. 吸去上清液。

4. 加入適量程序凍存液于離心管中，混合均勻，制成細(xì)胞混合液。

5. 將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中。

6. 將凍存管直接置于-80℃冰箱中，24 h后移入液氮長(zhǎng)期保存。

復(fù)蘇

1. 從液氮中取出凍存的細(xì)胞，立即放入37℃水浴鍋中快速解凍。

2. 待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后，立即逐滴加入少量細(xì)胞完全培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合，再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有8~10 mL該細(xì)胞完全培養(yǎng)基的試管中，輕輕混合均勻。

3. 離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：4℃，250 g，離心3~5 min)，吸去上清液。

4. 加入1~2 mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

5. 按照合適的接種密度將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)容器中，加入適量的已預(yù)熱的新鮮的細(xì)胞完全培養(yǎng)基。

6. 輕輕搖晃培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞分布均勻。

7. 鏡檢后放置于37℃ ，5% CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

主要參考文獻(xiàn)

[1] 佟明華；雷香麗；王亞萍；孔祥平；羅顯榮。大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的純化、凍存及成瘤性分析。中國(guó)組織工程研究。