概述^[1]

病毒是一類個(gè)體微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，只含單一核酸，必須在活細(xì)胞內(nèi)寄生并以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型微生物。病毒在自然界分布廣泛，可感染人體細(xì)胞，在細(xì)胞內(nèi)解體釋放出核酸分子，借細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的條件以獨(dú)特的生命活動(dòng)體系進(jìn)行復(fù)制，常引起人體發(fā)病。目前知道的DNA病毒有乙肝病毒，T2噬菌體，天花病毒，花椰菜花葉病毒等，本發(fā)明適用于所有的感染人類的血液中的病毒基因組DNA的提取，在已知的DNA病毒中，因?yàn)橐腋尾《緦?duì)人類的影響和危害，傳染性最強(qiáng)，因此本發(fā)明尤其適用于乙肝病毒基因組DNA的提取。

目前DNA檢查已有逐步取代血清學(xué)檢查(ELISA檢測(cè))的趨勢(shì)，尤其是乙肝病毒的檢測(cè)，乙肝病毒DNA檢測(cè)已經(jīng)成為臨床乙肝病毒診斷的主要方法之一。要進(jìn)行病毒DNA檢查，首先步也是最關(guān)鍵的一步便是要提取人體血液中病毒基因組DNA。

目前，提取乙肝病毒DNA的方法很多，有煮沸法、沉淀法、吸附法等，但這些方法有一個(gè)共同缺點(diǎn)：首先必須對(duì)血液進(jìn)行血漿和血清分離，用分離后的血清作為提取病毒DNA的標(biāo)本，這將造成以下幾個(gè)問(wèn)題：1)步驟繁瑣，增加工作量；2)操作過(guò)程中易二次污染，造成假陽(yáng)性結(jié)果；3)在分離時(shí)易造成病毒DNA的損失，對(duì)于微量病毒DNA檢測(cè)有影響，甚至檢測(cè)不到，形成假陰性結(jié)果。因此，不用進(jìn)行血清和血漿分離，研發(fā)一種直接從人體全血中病毒DNA提取試劑盒和方法意義重大。

適用范圍

病毒DNA提取試劑盒適合于從血清、細(xì)胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因組，不適合于RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。

組分^[2]

（1）病毒DNA提取試劑盒中的WashingBuffer中已經(jīng)加乙醇，無(wú)需單獨(dú)添加。

（2）VirusDNA/RNALB1，儲(chǔ)存時(shí)可能會(huì)有白色結(jié)晶沉淀，放置于56℃水浴鍋溶解后，不影響使用效果。

（3）蛋白酶K（20mg/ml）長(zhǎng)期保存請(qǐng)儲(chǔ)存于-20℃，短期室溫保存（6個(gè)月），其它組分儲(chǔ)存于室溫。

特征^[2]

毒DNA提取試劑盒僅需10min即得到高質(zhì)量病毒DNA和RNA。操作簡(jiǎn)單，無(wú)有機(jī)抽提或乙醇沉淀。重復(fù)性強(qiáng)，產(chǎn)量高。完全去除污染物和抑制劑，方便下游應(yīng)用。

案例^[2]

應(yīng)用病毒RNA提取試劑盒(B0129)從含（107copies/ml，106copies/ml，105copies/ml，104copies/ml，103copies/ml）丙型肝炎病毒（HCV）的血清樣品中純化得到病毒RNA，逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行qPCR，如圖所示，可檢測(cè)并穩(wěn)定擴(kuò)增103copies/ml的HCV病毒（每個(gè)PCR體系中約含10copies的HCV病毒分子）。

主要參考資料

[1] 協(xié)和醫(yī)學(xué)詞典

[2] 病毒RNA提取試劑盒操作說(shuō)明