人黑色素瘤細(xì)胞系介紹 [1]
細(xì)胞株名稱：A875 ，人黑色素瘤細(xì)胞
種屬：人
組織來源：皮膚
病理診斷：惡性黑色素瘤
生長特性：貼壁生長
形態(tài)特征：上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞描述：NGF受體陽性
微生物，支原體檢測：陰性
安全性：所有腫瘤細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。
培養(yǎng)條件[1]
完全培養(yǎng)基：90% DMEM（含2mM L-glutamine），10%胎牛血清
培養(yǎng)條件：37℃，CO2：5%
傳代方法：
收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況：
如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。
如果細(xì)胞已長滿（達(dá)80-90%），即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后將培養(yǎng)瓶翻過來讓胰酶與細(xì)胞面接觸大約10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量完全培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的次傳代一般是一傳三。
凍存方法：
凍存液：90%完全培養(yǎng)液，10%DMSO?，F(xiàn)用現(xiàn)配
儲存：液氮儲存
主要參考文獻(xiàn)
[1] 劉浩 蔣琛琛 程秀 方琳 陳超 張旭東 蔣志文；白藜蘆醇對人黑色素瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響?！吨袊幚韺W(xué)通報(bào)》 2011年07期