背景[1-3]
PIEC細(xì)胞專用培養(yǎng)基適用于PIEC細(xì)胞各個時期的無菌培養(yǎng)。PIEC細(xì)胞專用培養(yǎng)基包含PIEC細(xì)胞生長所需的各種物質(zhì)，不需要額外添加血清和其他成分可直接用于PIEC細(xì)胞的體外培養(yǎng)。
PIEC細(xì)胞是來源于豬髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞，生長形態(tài)為上皮樣貼壁生長。
培養(yǎng)條件
1．無菌環(huán)境
無毒和無菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件。細(xì)胞在活體內(nèi)，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過程中，缺乏機體免疫系統(tǒng)的保護而喪失對微生物的防御能力和對有害物質(zhì)的解毒能力。
3.適宜的滲透壓
高滲溶液或低滲溶液會引起細(xì)胞發(fā)生褶皺、腫脹、破裂。因此，滲透壓是體外培養(yǎng)細(xì)胞的重要條件之一。多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對滲透壓都有一定的耐受能力，實際應(yīng)用中，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細(xì)胞。
4．氣體環(huán)境與pH
細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境，氧氣、二氧化碳是細(xì)胞生存的必要條件。氧氣參與細(xì)胞的三羧酸循環(huán)，為細(xì)胞生存、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，是細(xì)胞生長的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。
液體培養(yǎng)基保存：
液體培養(yǎng)基應(yīng)于4℃冰箱避光保存，實驗前放入37℃預(yù)熱。未加血清液體培養(yǎng)基有效期為12個月。液體培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺會隨著儲存時間的延長而慢慢分解。如果細(xì)胞生長不良，可以再添加適量L-谷氨酰胺。
應(yīng)用[4][5]
用于伏馬毒素B1對豬血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷和凋亡的影響研究
以豬血管內(nèi)皮細(xì)胞（PIEC）為對象,研究了FB1對PIEC的毒性,探討FB1對細(xì)胞的氧化損傷以及細(xì)胞凋亡的影響,為伏馬毒素對動物的毒性研究提供依據(jù)。研究目的:以PIEC細(xì)胞為研究對象,通過不同濃度的FB1毒染PIEC細(xì)胞,探討FB1對PIEC細(xì)胞的毒性作用。
研究方法:采用體外培養(yǎng)的方法來獲取對數(shù)生長期的PIEC細(xì)胞,用不同濃度的FB1（10,25,50μg/ml）染毒PIEC細(xì)胞。通過細(xì)胞增殖試驗（MTT法）確定FB1劑量與作用時間,顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)。
FB1毒染PIEC細(xì)胞48h后,硝酸還原酶法檢測NO的含量;硫代巴比妥酸法測定細(xì)胞中MDA的含量;鉬酸銨法檢測CAT的活性;TNB法測定細(xì)胞中TrxR的活性;氮藍(lán)四唑（NBT）顯色法檢測SOD的活性;間接法檢測GSH的含量以及GSH-PX的活性;Annexin-FITC/PI雙染色法檢測細(xì)胞凋亡,用熒光探針DCFH-DA和JC-1法分別進(jìn)行ROS含量以及線粒體膜電位的檢測;熒光定量PCR檢測凋亡相關(guān)基因Bax,Bcl-2,Caspase-3,Caspase-9 mRNA的表達(dá)。
研究結(jié)果:細(xì)胞增殖試驗篩選出FB1的作用時間為48h,細(xì)胞存活率在70%左右。高劑量組的FB1能夠抑制細(xì)胞增殖（P<0.05）,能顯著升高M(jìn)DA和降低NO的含量（P<0.05）以及顯著降低SOD活性（P<0.05）
參考文獻(xiàn)
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