背景[1-3]
臍血間質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基適用于臍血間質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化使用，使用該產(chǎn)品進(jìn)行臍血間質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)時(shí)能夠有效提高誘導(dǎo)效率。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細(xì)胞，它能分化成許多種組織細(xì)胞，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。
在新生兒臍帶組織中臍靜脈周?chē)嬖谝粚痈缓g充質(zhì)干細(xì)胞的凝膠狀物質(zhì)，稱(chēng)作華通氏膠，從這一膠質(zhì)層中提取分離得到的間充質(zhì)干細(xì)胞就被稱(chēng)為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。間充質(zhì)干細(xì)胞是干細(xì)胞的一種，因能分化為間質(zhì)組織而得名，具有亞全能分化潛能，在特定的體內(nèi)外環(huán)境下，能夠誘導(dǎo)分化成為多種組織細(xì)胞。間充質(zhì)干細(xì)胞具有干細(xì)胞的共性，即自我更新、多向分化和歸巢的能力。間充質(zhì)干細(xì)胞具有向多種類(lèi)型細(xì)胞分化的能力，可以分化為神經(jīng)、心臟、肝臟、骨、軟骨、肌腱、脂肪、上皮等多種細(xì)胞。
培養(yǎng)方法
取新鮮健康臍帶，用PBS沖洗干凈后，用剪刀鑷子剔去血管，剝出里面的華氏膠組織，將所得組織充分剪碎至1 mm3大小，加入α-MEM培養(yǎng)液置于37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng)液中含10%FBS，100U/ml青霉素，100U/ml鏈霉素。臍帶組織培養(yǎng)5-7天后，可見(jiàn)有部分細(xì)胞從組織塊周?chē)莱?，形態(tài)呈細(xì)小的梭形，一周后，細(xì)胞開(kāi)始迅速增殖，形成大小不等的細(xì)胞集落，待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)后，用0.25%胰蛋白酶消化傳代。
應(yīng)用[4][5]
用于人臍血源間充質(zhì)干細(xì)胞與其基質(zhì)細(xì)胞對(duì)體外造血調(diào)控作用的比較研究
通過(guò)比較人臍血源基質(zhì)細(xì)胞和人臍血源間充質(zhì)干細(xì)胞體外有關(guān)生物學(xué)特點(diǎn)及其對(duì)人臍血CD34~+造血干細(xì)胞的粘附率、遷移率；對(duì)人臍血CD34~+造血干細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用等方面探討來(lái)揭示人臍血源基質(zhì)細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞體外支持、調(diào)控造血作用的特點(diǎn)，以豐富對(duì)人臍血源基質(zhì)細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞的全面認(rèn)識(shí)，為今后人臍血源基質(zhì)細(xì)胞的臨床科學(xué)應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法：
人臍血源間充質(zhì)干細(xì)胞和人臍血源基質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)及其細(xì)胞生物學(xué)特性的比較、
1. 人臍血源間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCBDMSCs)和人臍血源基質(zhì)細(xì)胞(hUCBDSCs)的體外分離培養(yǎng)。健康嬰兒(足月胎齡)臍帶血在4小時(shí)內(nèi)經(jīng)6%的明膠沉降紅細(xì)胞后，用1.077g/l的Percoll淋巴細(xì)胞分離液，密度梯度離心獲得單個(gè)核細(xì)胞(mononuclear cell,MNC)。所得單個(gè)核細(xì)胞分別在改良Dexter體系培養(yǎng)hUCBDSCs，在間充質(zhì)干細(xì)胞專(zhuān)門(mén)培養(yǎng)基(mesenchymal stem cell medium,MSCM)培養(yǎng)hUCBDMSCs。
2. 倒置顯微鏡下觀察兩類(lèi)細(xì)胞的形態(tài)、貼壁、集落形成，細(xì)胞伸展及融合情況；采用CCK-8法和Transwell法分別檢測(cè)兩類(lèi)細(xì)胞的體外增殖、粘附和對(duì)hUCB-MNCs遷移的影響；兩類(lèi)細(xì)胞周期及細(xì)胞表面抗原的流式檢測(cè)(細(xì)胞表面抗原選擇：Fn、Lm、CD45、CD29、CD44、CD34、Stro-1和CD106)。
3.兩類(lèi)細(xì)胞向成骨、成脂、成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的檢測(cè)。用茜素紅染色檢測(cè)成骨情況，用油紅染色檢測(cè)成脂情況，用阿辛藍(lán)染色檢測(cè)成軟骨情況。
參考文獻(xiàn)
[1]Human umbilical cord blood-derived stromal cells prevent graft-versus-host disease in mice following haplo-identical stem cell transplantation[J].Lei Hao,Lei Gao,Xing-Hua Chen,Zhong-Min Zou,Xi Zhang,Pei-Yan Kong,Cheng Zhang,Xian-Gui Peng,Ai-Hua Sun,Qing-Yu Wang.Cytotherapy.2011(1)
[2]Cotransplantation of human umbilical cord blood-derived stromal cells enhances hematopoietic reconstitution and engraftment in irradiated BABL/c mice[J].Ying Liu,Long Yi,Xi Zhang,Lei Gao,Cheng Zhang,Yi-mei Feng,Xing-hua Chen.Cancer Biology&Therapy.2011(1)
[3]Simultaneous expansion and harvest of hematopoietic stem cells and mesenchymal stem cells derived from umbilical cord blood[J].Song Kedong,Fan Xiubo,Liu Tianqing,Hugo M.Macedo,Jiang LiLi,Fang Meiyun,Shi Fangxin,Ma Xuehu,Cui Zhanfeng.Journal of Materials Science:Materials in Medicine.2010(12)
[4]Hypothesis:Human Umbilical Cord Blood-derived Stromal Cells Promote Megakaryocytopoiesis Through the Influence of SDF-1 and PECAM-1[J].Yimei Feng,Xinghua Chen,Lei Gao.Cell Biochemistry and Biophysics.2010(1)
[5]孫浩平.人臍血源間充質(zhì)干細(xì)胞與其基質(zhì)細(xì)胞對(duì)體外造血調(diào)控作用的比較研究[D].第三軍醫(yī)大學(xué),2012.