背景^[1-3]

人多免疫球蛋白受體(POLY-IGR)ELISA KIT應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人多免疫球蛋白受體(POLY-IGR)水平。用純化的人多免疫球蛋白受體(POLY-IGR)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入人多免疫球蛋白受體(POLY-IGR)，再與HRP標(biāo)記的人多免疫球蛋白受體(POLY-IGR)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人多免疫球蛋白受體(POLY-IGR)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人多免疫球蛋白受體(POLY-IGR)濃度。

人聚合免疫球蛋白受體（pIgR）是一種100 kDa的I型跨膜糖蛋白。其前體是764個(gè)氨基酸。它包含一個(gè)18個(gè)氨基酸的信號序列，一個(gè)620個(gè)氨基酸的細(xì)胞外區(qū)域，一個(gè)23個(gè)氨基酸的跨膜片段和一個(gè)103個(gè)氨基酸的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。pIgR由在細(xì)胞外區(qū)域具有五個(gè)Ig樣結(jié)構(gòu)域的分泌性上皮細(xì)胞合成，并轉(zhuǎn)移至基底外側(cè)質(zhì)膜。對于IgA和IgM聚合物，除了α-重鏈和Ig輕鏈外，還包含并需要一個(gè)短的多肽，稱為連接鏈（J鏈）。pIgR可以結(jié)合更大的IgA（pIgA）和五聚體IgM聚合物，作為跨上皮運(yùn)輸IgA和IgM的載體。受體-配體復(fù)合物被內(nèi)吞并轉(zhuǎn)入頂端表面，然后蛋白水解切割pIgR的第六個(gè)胞外域并產(chǎn)生分泌性IgA（SIgA），該pIgR片段稱為分泌成分（SC）。SIgA是粘膜免疫系統(tǒng)的重要組成部分。SC具有抗微生物特性，可保護(hù)SIgA免受蛋白水解降解。

應(yīng)用^[4][5]

人多免疫球蛋白受體(POLY-IGR)ELISA KIT用于人多聚免疫球蛋白受體pIgR介導(dǎo)EMT的作用研究及機(jī)制初探。

多聚免疫球蛋白受體(pIgR)屬于I型跨膜糖蛋白,可以與多聚免疫球蛋白A和多聚免疫球蛋白M特異性結(jié)合,通過穿胞轉(zhuǎn)運(yùn),將它們從上皮細(xì)胞基底側(cè)膜轉(zhuǎn)運(yùn)到頂膜,并最終分泌到外分泌液中去。MDCK是狗的腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞,該細(xì)胞株因適合作為上皮生物學(xué)模型而被廣泛應(yīng)用。在組織培養(yǎng)中,MDCK細(xì)胞能夠形成上皮致密單層。本課題組前期實(shí)驗(yàn)利用真核轉(zhuǎn)染技術(shù),成功構(gòu)建了人pIgR穩(wěn)定高表達(dá)的MDCK細(xì)胞株(命名為MDCK-pIgR,陰性對照組細(xì)胞命名為MDCK-mock),在研究pIgR的極性轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)意外發(fā)現(xiàn),MDCK-pIgR細(xì)胞株的增殖速加快,表型由柱狀變?yōu)槌杉±w維細(xì)胞樣,并且,與MDCK-mock組細(xì)胞相比,這些細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性增強(qiáng)。進(jìn)一步的表明pIgR的表達(dá)也許能夠促進(jìn)EMT的發(fā)生。采用RT-PCR、Western-Blotting等技術(shù)檢測了ERK、Snail、角蛋白、F-actin,并采用IP方法探討pIgR是否能夠發(fā)生磷酸化調(diào)節(jié)細(xì)胞信號。推測pIgR介導(dǎo)EMT的可能分子機(jī)制為:pIgR的高表達(dá)促進(jìn)ERK1/2磷酸化,上調(diào)Snail,下調(diào)E-鈣粘素的表達(dá),粘附連接破壞,細(xì)胞骨架重新排列,從而導(dǎo)致EMT的發(fā)生。而上述過程是由pIgR Tyr的磷酸化引起的。本論文的研究發(fā)現(xiàn)了pIgR在調(diào)節(jié)EMT中的作用,拓展了pIgR的研究領(lǐng)域。為pIgR的促腫瘤生成作用奠定了基礎(chǔ)。提示pIgR是腫瘤治療中的潛在靶點(diǎn)?；谶M(jìn)一步的評價(jià),在特殊腫瘤組織中抑制pIgR的表達(dá)可能會(huì)成為阻斷腫瘤轉(zhuǎn)移的有效手段。

參考文獻(xiàn)

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