背景[1-3]
CHAT膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶抗體是以CHAT膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶為抗原的多克隆抗體，可以特異性結(jié)合CHAT膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶。CHAT膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶抗體主要用于ICC/IF,Dotblot,ELISA,IHC-P,IHC-Fr,Immunomicroscopy,WB等CHAT膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶檢測實(shí)驗(yàn)。
抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）和抗體超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性。這種特性是由抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的。除兩者分子構(gòu)型高度互補(bǔ)外，抗原表位和抗體超變區(qū)必須密切接觸，才有足夠的結(jié)合力。
乙酰膽堿，是一種神經(jīng)遞質(zhì)。在組織內(nèi)迅速被膽堿酯酶破壞。乙酰膽堿能特異性地作用于各類膽堿受體，但其作用廣泛，選擇性不高。臨床不作為藥用，一般只做實(shí)驗(yàn)用藥。在神經(jīng)細(xì)胞中，乙酰膽堿是由膽堿和乙酰輔酶A在膽堿乙酰移位酶（膽堿乙?；福┑拇呋饔孟潞铣傻?。主流研究認(rèn)為人體內(nèi)該物質(zhì)含量增多與阿爾茲海默病（老年癡呆癥）的癥狀改善顯著相關(guān)。
膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶是一種在神經(jīng)元胞體內(nèi)合成的酶。當(dāng)該轉(zhuǎn)移酶被合成以后，通過軸質(zhì)流動方式轉(zhuǎn)移到神經(jīng)軸突末端。其功能是將乙酰輔酶A轉(zhuǎn)移到膽堿上，導(dǎo)致神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的形成。
應(yīng)用[4][5]
用于膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶在人牙周膜細(xì)胞中的表達(dá)及尼古丁對其表達(dá)的影響研究
觀察膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(choline acetyltransferase,ChAT)在人牙周膜成纖維細(xì)胞(Periodontal ligament fibroblast,PDLF)中的表達(dá),并探討ChAT調(diào)節(jié)在參與尼古丁對PDLF損傷過程中的作用,通過建立尼古丁作用下PDLF體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?采用RT-PCR,DNA測序和免疫組化等方法,觀察PDLF中是否存在ChAT及在尼古丁作用下其表達(dá)的改變。
旨在探討ChAT在尼古丁與吸煙相關(guān)性牙周炎發(fā)生發(fā)展中的作用,為尋找新的牙周炎防治途徑提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1人牙周膜成纖維細(xì)胞中ChAT的表達(dá)取12-18歲志愿者正畸減數(shù)拔除的健康前磨牙,刮取根中1/3處牙周膜組織,改良組織塊法原代培養(yǎng)PDLF,鑒定,傳代,4-6代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。
采用免疫熒光及RT-PCR方法檢測PDLF中ChAT的表達(dá)。免疫熒光結(jié)果顯示,PDLF胞漿中存在ChAT的陽性表達(dá);RT-PCR結(jié)果顯示在與陽性對照組相同位置299 bp處可見陽性條帶,且經(jīng)克隆測序證實(shí)擴(kuò)增產(chǎn)物為ChAT。初步證實(shí),在PDLF中存在ChAT蛋白及mRNA表達(dá)。
2尼古丁對ChAT在人牙周膜成纖維細(xì)胞中表達(dá)的影響第4代PDLF隨機(jī)分為兩組,對照組:5%新生牛血清DMEM培養(yǎng)液;實(shí)驗(yàn)組:尼古丁硫酸鹽(10-12mol/L)溶于含5%新生牛血清DMEM培養(yǎng)液。37℃、5%CO2孵箱中孵育24h。RT-PCR、實(shí)時定量PCR及免疫熒光方法檢測尼古丁對ChAT在PDLF表達(dá)的影響。
參考文獻(xiàn)
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[2]A New Inflammatory Cytokine on the Block:Re-thinking Periodontal Disease and the Th1/Th2 Paradigm in the Context of Th17 Cells and IL-17[J].Gaffen,S L,Hajishengallis,G.Journal of Dental Research.2008(9)
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[4]Receptor-mediated tobacco toxicity:Alterations of the NF-κB expression and activity downstream ofα7 nicotinic receptor in oral keratinocytes[J].Juan Arredondo,Alexander I.Chernyavsky,David L.Jolkovsky,Kent E.Pinkerton,Sergei A.Grando.Life Sciences.2007(24-2)
[5]葛鑫.膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶在人牙周膜細(xì)胞中的表達(dá)及尼古丁對其表達(dá)的影響[D].第四軍醫(yī)大學(xué),2010.