背景^[1-3]

小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞是來源于小鼠的成骨細(xì)胞樣BALB/c貼壁細(xì)胞。細(xì)胞抗原表達(dá)：Ⅷ因子、整合唾液酸蛋白(BSP)、二聚糖、飾膠蛋白聚糖、絨毛蛋白。此外，骨唾液酸蛋白、二聚糖、飾膠蛋白聚糖和骨調(diào)素的表達(dá)顯示K7M2 wt[K7M2-WT]細(xì)胞骨家族細(xì)胞特性。

小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞可在無血清的狀態(tài)下培養(yǎng)。對(duì)于小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞中的腫瘤干細(xì)胞相關(guān)亞群可以進(jìn)行篩選和鑒定骨肉瘤細(xì)胞系。方法通過無血清懸浮培養(yǎng)初步富集小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞腫瘤干細(xì)胞，觀察其形成腫瘤干細(xì)胞球過程中的細(xì)胞形態(tài)，并在有血清培養(yǎng)基中誘導(dǎo)其分化。

小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

應(yīng)用^[4][5]

用于Runx2基因?qū)侨饬黾?xì)胞的生物學(xué)的影響及相關(guān)體內(nèi)和體外機(jī)制的研究

探討干擾或轉(zhuǎn)染Runx2基因后對(duì)小鼠骨肉瘤細(xì)胞K7M2、K7和人骨肉瘤細(xì)胞株HOS體外,體內(nèi)生物學(xué)活性的影響。

方法:將Runx2和si Runx2轉(zhuǎn)染到骨肉瘤細(xì)胞中,觀察細(xì)胞變化。加入IL-6抗體后檢測培養(yǎng)上清和細(xì)胞的變化。將上述細(xì)胞注射到BALB/C小鼠體內(nèi),待小鼠成瘤后觀察小鼠的成瘤率、肺轉(zhuǎn)移率、生存率及生存周期,同時(shí)觀察各組骨破壞的程度。

結(jié)果:si Runx2可以抑制細(xì)胞體外增殖,Runx2作用相反。轉(zhuǎn)染Runx2可提高培養(yǎng)上清液的IL-6,同時(shí)提高RANKL表達(dá),而si Runx2結(jié)果相反。體內(nèi)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)si Runx2明顯抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移,還能減輕骨質(zhì)破壞的程度。

結(jié)論:干擾Runx2基因表達(dá)對(duì)骨肉瘤有明顯的治療效果。

參考文獻(xiàn)

[1]Comparative expression of RANK,RANKL,and OPG in keratocystic odontogenic tumors,ameloblastomas,and dentigerous cysts[J].Oral Surgery,Oral Medicine,Oral Pathology,Oral Radiology and Endodontology.2008(3)

[2]Tumor-associated osteoclast activity and aggressiveness of osteosarcoma[J].Sofia Avnet,Alessandra Longhi,Manuela Salerno,Jussi Halleen,Francesca Perut,Donatella Granchi,Armando Giunti,Nicola Baldini.Bone.2008

[3]The role of Dkk-1 in human osteosarcoma and its regulation[J].Helen S.McCarthy,John H.H.Williams,Michael J.Marshall.Bone.2008

[4]A review of clinical and molecular prognostic factors in osteosarcoma[J].Jonathan C.M.Clark,Crispin R.Dass,Peter F.M.Choong.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology.2008(3)

[5]吳丹凱.Runx2基因?qū)侨饬黾?xì)胞的生物學(xué)的影響及相關(guān)體內(nèi)和體外機(jī)制的研究[D].吉林大學(xué),2008.