背景[1-3]
NG108-15[108CC15]小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細(xì)胞,原名108CC15。這個細(xì)胞株由小鼠N18TG2神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞和大鼠C6-BU-1神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞在失活仙臺病毒存在下融合而成。
細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌,培養(yǎng)條件：DMEM（高糖）+10%FBS；37℃，5%CO2。
NG108-15[108CC15]小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細(xì)胞
培養(yǎng)方法：
收到NG108-15(小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細(xì)胞)后，在倒置顯微鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況：如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
如果細(xì)胞已長滿（達(dá)80-90%）。即可進行傳代，具體步驟如下：
1）棄去培養(yǎng)液，用PBS洗1-2次。
2）向瓶內(nèi)加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有6ml含10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。
3）加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新別的地方培養(yǎng)。4）傳代比例：1:2-1:3
應(yīng)用[4][5]
用于二苯乙烯苷對岡田酸誘導(dǎo)的NG108-15細(xì)胞Tau蛋白異常磷酸化的干預(yù)作用與機制研究
采用岡田酸誘導(dǎo)的NG108-15細(xì)胞制備阿爾茲海默病細(xì)胞模型,通過檢測二苯乙烯苷對誘導(dǎo)的NG108-15細(xì)胞中磷酸化的Tau蛋白以及相關(guān)磷酸激酶和磷酸酶、磷酸激酶調(diào)控因子表達(dá)的影響,探討二苯乙烯苷對阿爾茲海默病細(xì)胞模型Tau蛋白磷酸化調(diào)控的影響及作用機制。
方法:采用MTT法觀察TSG作用于岡田酸誘導(dǎo)的NG108-15細(xì)胞24 h時的增殖情況,選取合適的劑量作為造模濃度。取對數(shù)生長期的NG108-15細(xì)胞,分為正常組、模型組、TSG低、中、高劑量（50、100、200μmol/L）組。
利用AO/EB雙熒光染色法檢測TSG對細(xì)胞凋亡的影響;蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測磷酸激酶蛋白CDK5、GSK3β、PKA、CK1、MAPK1、JNK,磷酸酶蛋白PP2A、PP2B、PP5和P35、Tau、P-Tau蛋白的表達(dá)。RT-PCR法檢測CDK5、GSK3β、PP2A、PP2B mRNA的變化。
免疫熒光（Immunofluorescence）檢測CDK5、GSK3β、PP2A、PP2B和Tau蛋白表達(dá)和分布。采用SPSS軟件對正常組、模型組和高、中、低給藥組的Tau、P-Tau蛋白,磷酸激酶CDK5、GSK3β、PKA、CK1、MAPK1、JNK蛋白、磷酸酶蛋白PP2A、PP2B、PP5和P35、Tau、P-Tau蛋白,磷酸激酶CDK5、GSK3β和磷酸酶蛋白PP2A、PP2B基因之間相關(guān)性進行分析。
結(jié)果:在MTT實驗中,NG108-15細(xì)胞隨OA濃度升高,存活率下降,當(dāng)濃度為80nmol/L時,細(xì)胞存活率下降明顯（P<0.01）,細(xì)胞衰老皺縮,細(xì)胞形態(tài)學(xué)發(fā)生改變,AO/BE熒光染色顯示細(xì)胞有凋亡產(chǎn)生。
選取80nmol/L作為造模劑量,經(jīng)給藥后,TSG能夠增強岡田酸誘導(dǎo)的NG108-15細(xì)胞的增殖能力,呈一定的劑量依賴;與模型組比較,TSG能抑制岡田酸對NG108-15細(xì)胞的衰老,提高細(xì)胞存活率（P<0.05）。
TSG對OA誘導(dǎo)的NG108-15細(xì)胞Tau蛋白磷酸化的影響Western blot實驗中顯示,與正常組相比,模型組中P-Tau的含量顯著升高（P<0.01）,TSG給藥后與模型組相比,中、高劑量組P-Tau含量下降（P<0.01或P<0.05）,免疫熒光檢測中,與模型組相比,TSG給藥組能減少Tau蛋白的聚集。結(jié)果提示,TSG降低OA誘導(dǎo)的NG108-15細(xì)胞的Tau磷酸化水平,減少Tau蛋白的聚集程度。
參考文獻(xiàn)
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