背景^[1-3]

改良布氏(BREWER)硫代羥乙酸鹽培養(yǎng)基用于厭氧菌和微需氧菌的培養(yǎng)。

成分：(g/L)Proteose Peptone 10.00；Infusion from Beef 17.50；Dextrose 5.00；Sodium Chloride 5.00；Dipotassium Phosphate 2.00；Sodium Thioglycollate 0.50；Methylene Blue 0.002；Agar 0.50。

厭氧菌（anaerobic bacteria）也叫厭氣菌。是一類在無氧條件下比在有氧環(huán)境中生長好的細(xì)菌，而不能在空氣（18%氧氣）和（或）10%二氧化碳濃度下的固體培養(yǎng)基表面生長的細(xì)菌。這類細(xì)菌缺乏完整的代謝酶體系，其能量代謝以無氧發(fā)酵的方式進(jìn)行。

改良布氏(BREWER)硫代羥乙酸鹽培養(yǎng)基

厭氧菌尚無公認(rèn)的確切定義，但通常認(rèn)為這是一類只能在低氧分壓的條件下生長，而不能在空氣（18%氧氣）和（或）10%二氧化碳濃度下的固體培養(yǎng)基表面生長的細(xì)菌。按其對氧的耐受程度的不同，可分為專性厭氧菌、微需氧厭氧菌和兼性厭氧菌。

根據(jù)對O?的耐受程度，可將厭氧菌分為三大類：

（1）對氧極端敏感的厭氧菌：代表菌種為月形單胞菌，這類細(xì)菌對厭氧條件要求很高，在空氣中暴露10min即死亡，臨床上很難分離出。

（2）中度厭氧菌：代表菌種為脆弱擬桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等臨床分離常見的厭氧菌。它們在空氣中暴露60～90min或在膿汁抽出72h后仍然能分離出來。

（3）耐氧厭氧菌：代表菌種為溶組織梭菌。這類細(xì)菌不能利用氧，在無氧條件下生長好，而在有氧條件下生長不佳。

應(yīng)用^[4][5]

用于古井窖泥菌群中厭氧菌的純化培養(yǎng)與分子鑒定研究

利用厭氧培養(yǎng)、純培養(yǎng)技術(shù)以及16S全長高通量測序?qū)涯嘀械模▍捬酰┪⑸锶郝溥M(jìn)行分離鑒定及宏基因組測序,得到了窖泥中部分厭氧菌的名單,并將厭氧培養(yǎng)得到的純菌落名單與高通量測序名單進(jìn)行比較。

窖泥和酒醅以及酒醅-底層窖泥界面的黃水被用作制備培養(yǎng)基的主要部分,配以厭氧氣體在厭氧工作站對黃水及底層窖泥中的微生物進(jìn)行厭氧培養(yǎng),利用該方法可以得到大量厭氧菌落。

確定培養(yǎng)條件后,對不同質(zhì)量窖泥中的微生物進(jìn)行培養(yǎng),記錄多種形態(tài)學(xué)參數(shù),并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分類。對代表性菌落進(jìn)行基因組DNA提取,全長16S r DNA擴(kuò)增和Sanger測序。結(jié)果證明,大多數(shù)菌落屬于梭菌和乳酸桿菌,但絕大多數(shù)測序的菌落無法查到詳細(xì)的分類信息。

利用16S全長高通量測序技術(shù),對打分結(jié)果有明顯差異的酒樣對應(yīng)的19個(gè)窖泥樣本進(jìn)行測序。得到窖泥中非常復(fù)雜的厭氧菌物種排名名單。

將不同質(zhì)量窖泥的優(yōu)勢菌群名單分別與厭氧培養(yǎng)分離測序結(jié)果進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)一些厭氧培養(yǎng)分離出的梭菌屬（Clostridium bornimense,Lactobacillus brevis）并未見于高通量測序結(jié)果中。即證明了高通量測序結(jié)果并不完全。鑒于厭氧培養(yǎng)并測序得到的菌種信息相對比較單一（只有梭菌和乳酸桿菌）,這也說明窖泥中厭氧菌的培養(yǎng)方法還需進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)

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[2]Identification and quantification of the caproic acid-producing bacterium Clostridium kluyveri in the fermentation of pit mud used for Chinese strong-aroma type liquor production[J].Hu,Xiao-long,Du,Hai,Xu,Yan International Journal of Food Microbiology.

[3]Difference of microbial community stressed in artificial pit muds for Luzhou-flavour liquor brewing revealed by multiphase culture-independent technology[J].Zhang,L.,Zhou,R.,Niu,M.,Journal of applied microbiology.

[4]Cultivable Fusobacterium species in chronic periodontitis microbiota identified with matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry[D].Kim,Ji Sun 2015

[5]韓穎．古井窖泥菌群中厭氧菌的純化培養(yǎng)與分子鑒定[D]．哈爾濱工業(yè)大學(xué),2017