背景[1-3]
VERO C1008(E6)非洲綠猴腎細胞是VERO 76的克隆細胞株,而VERO 76是初始VERO細胞株的一個衍生株。Vero細胞系是從非洲綠猴的腎臟上皮細胞中分離培養(yǎng)出來的。這個細胞系由日本千葉大學的Yasumura和Kawakita于1962年3月27日擴增出來。該細胞系取“Verda Reno”（世界語意為‘綠色的腎臟’）的簡寫而命名為"Vero"，而"Vero"本身在世界語中也有“真相”的意思。
Vero細胞系是連續(xù)的非整倍體細胞。連續(xù)細胞系可以經過許多分裂周期而不衰老。非整倍體是指細胞中的染色體數目與通常的不同。
VERO C1008(E6)非洲綠猴腎細胞
Vero細胞有干擾素分泌缺陷的特點；與其它普通哺乳動物細胞不同，當被病毒感染時，它不能分泌干擾素，但它仍然具有α/β-干擾素的受體，所以對于其它來源的干擾素仍有正常的反應。
Vero細胞用途廣泛：
1.vero細胞用于檢查大腸桿菌毒素。大腸桿菌毒素最初就因此細胞系而被命名為Vero毒素，后來被稱為志賀菌素樣毒素，因為它與在痢疾志賀菌中分離出來的志賀菌素很相似。
2.作為培養(yǎng)病毒的細胞宿主。比如：測定某種藥物對病毒復制速度的影響，檢驗是否存在狂犬病毒或者為了研究目的培養(yǎng)病毒。
3.作為真核寄生蟲的宿主細胞，尤其是錐體蟲屬。
4.用于疫苗生產中的病毒培養(yǎng)基質細胞，是在限定代次內不致癌的異倍體細胞，WHO批準可以用于人類疫苗的生產基質。
應用[4][5]
用于抗PEDV單克隆抗體的制備及雙抗體夾心ELISA方法的建立研究
PED為高度接觸性腸道傳染病,感染仔豬表現為發(fā)熱、嘔吐、脫水、嚴重腹瀉等癥狀。PEDV具有4種結構蛋白,分別為纖突蛋白、膜糖蛋白、小膜蛋白和核衣殼（Nucleocapsid,N）蛋白。其中N蛋白是一個重要的結構蛋白,并且高度保守,常作為檢測PEDV的目的蛋白。
通過Vero C1008細胞繁殖本實驗室內保存的PEDV CV777細胞適應株,隨后通過梯度密度離心得到純化PEDV,經SDS-PAGE和Western blot分析,PEDV純化效果良好。將純化后的PEDV免疫BALB/c小鼠,通過雜交瘤細胞制備技術獲得3株穩(wěn)定分泌抗N蛋白抗體的雜交瘤細胞,分別命名13C3A10-2、6G8和12E2H8-2。間接免疫熒光實驗結果表明,3株單克隆抗體均能與PEDV疫苗毒CV777及野生毒株產生特異性的熒光信號。
Western blot實驗表明,3種單克隆抗體均能與病毒N蛋白和重組表達的N蛋白發(fā)生反應。應用效價最高的單克隆抗體13C3A10-2作為捕獲抗體,PEDV陽性多克隆血清內抗體作為結合抗體,初步建立了雙抗體夾心ELISA方法用于檢測病料中的PEDV。
繼而,對于建立的ELISA方法進行了特異性、敏感性、穩(wěn)定性的檢測,應用本方法初步檢測了65份病料,并與RT-PCR檢測結果進行了符合率的比較。結果表明,符合率為94.7%,可以初步應用于PEDV的檢測。
參考文獻
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[2]Real-time reverse transcription recombinase polymerase amplification assay for rapid detection of porcine epidemic diarrhea virus[J].Jianchang Wang,Ruoxi Zhang,Jinfeng Wang,Qingan Han,Libing Liu,Yanan Li,Wanzhe Yuan.Journal of Virological Methods.2018
[3]Investigation of three outbreaks of Porcine Epidemic Diarrhea in Germany in 2016 demonstrates age dependent differences in the development of humoral immune response[J].Julia Stadler,Lisa Moser,Jasmin Numberger,Anna Rieger,Katrin Strutzberg-Minder,Thorsten Stellberger,Andrea Ladinig,Mathias Ritzmann,Robert Fux.Preventive Veterinary Medicine.2018
[4]Tissue localization,shedding,virus carriage,antibody response,and aerosol transmission of Porcine epidemic diarrhea virus following inoculation of 4-week-old feeder pigs[J].Megan C.Niederwerder,Jerome C.Nietfeld,Jianfa Bai,Lalitha Peddireddi,Barbara Breazeale,Joe Anderson,Maureen A.Kerrigan,Baoyan An,Richard D.Oberst,Kimberly Crawford,Kelly M.Lager,Darin M.Madson,Raymond R.R.Rowland,Gary A.Anderson,Richard A.Hesse.Journal of Veterinary Diagnostic Investigation.2016(6)
[5]王睿.抗PEDV單克隆抗體的制備及雙抗體夾心ELISA方法的建立[D].中國農業(yè)科學院,2018.