背景[1][2][3]
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌（Yersinia enterocolitica）是少數(shù)幾種能在冷藏溫度下（0－4℃）生長(zhǎng)繁殖的腸道致病菌之一。流行病學(xué)研究表明，食品在冰箱中儲(chǔ)藏過長(zhǎng)的時(shí)間，能增加耶爾森氏菌感染的危險(xiǎn)。小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌病（耶氏菌?。┦?0 世紀(jì)80 年代才受到重視的一種新的腸道傳染病，不少地區(qū)耶氏菌引起的胃腸炎和嚴(yán)重腹瀉，比痢疾還多。
1981年我國(guó)才發(fā)現(xiàn)此病，通過全國(guó)性調(diào)查和研究，發(fā)現(xiàn)其在我國(guó)的分布非常廣泛。20 世紀(jì)80 年代中期我國(guó)發(fā)生過兩次大的流行，造成500 多人感染，主要由血清型O：3 和O：9 引起。鑒于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的危害性，很多國(guó)家都已將該菌列為食品的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。
我國(guó)也頒布了檢測(cè)該菌的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌是近年來受到重視的食源性病原菌，目前已發(fā)現(xiàn)58 個(gè)血清型，研究認(rèn)為僅少數(shù)幾個(gè)血清型有致病性。雖然由該菌感染引起的腹瀉可以自愈，但感染引起的一些慢性遷延型疾病較嚴(yán)重。
特點(diǎn)[1]
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌屬腸桿菌科，最適生長(zhǎng)溫度為22～29℃，在0℃也能生長(zhǎng)。有34種O抗原，19種H抗原和1種K抗原，由抗原組成可分成許多菌群。從病人分離出的菌型大多數(shù)為O3型，少數(shù)為O5、O8、O9和混合型?？梢鸺毙晕改c炎型食物中毒，其發(fā)病情況與沙門氏菌和志賀氏菌引起的食物中毒相似。
在自然界中分布較廣，動(dòng)物帶菌率也較高，乳、肉、水產(chǎn)品(牡蠣、貝類)、糕點(diǎn)等食品及馬、豬、鹿、家禽、狗、鼠等動(dòng)物的排泄物中皆能檢出。人群對(duì)該菌普遍易感，但以兒童為最。對(duì)氯霉素、慶大霉素、鏈霉素、卡那霉素、硝基呋喃、多粘菌素B和四環(huán)素敏感。
致病性[4][5]
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌是一個(gè)很重要的人類和動(dòng)物腸道致病菌，病人最常見的臨床癥狀有腹瀉，胃腸炎，腸系膜淋巴結(jié)炎，更為嚴(yán)重者可引起敗血癥，伴隨肝膿腫。其它器官組織也會(huì)產(chǎn)生病變，如活動(dòng)性關(guān)節(jié)炎和結(jié)節(jié)性紅斑。小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(Yersinia enterocolitica，Y. e)，簡(jiǎn)稱耶氏菌，屬于腸桿菌科耶爾森氏菌屬，最早1933年發(fā)現(xiàn)于美國(guó)紐約州，由Frederiksen在1964年命名的，小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌在自然界分布很廣，動(dòng)物是該菌的重要宿主，幾乎所有的家畜都曾發(fā)現(xiàn)該 菌的自然感染，其中豬攜帶量最高，其次為犬、雞、牛和羊等。
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌是一類人畜共患病病原菌，也是重要的食源性致病菌之一，很多國(guó)家都已將該菌列為進(jìn)出口食的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，在過去的二十年間，歐、美等國(guó)家發(fā)生了多起的由該菌引起的食源性中 毒事件；在上世紀(jì)80年代中期我國(guó)證實(shí)有兩次大的暴發(fā)流行，造成五百多人感染，其原因均為食物污染小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌引起的。
該菌具有嗜冷性，能在冷藏條件下生長(zhǎng)與 繁殖，而且在一定條件下會(huì)產(chǎn)生耐熱性腸毒素，是冷藏食品的一大威脅，尤其是貯藏于冰箱 中的肉制品、奶制品。人感染后，其臨床表現(xiàn)多樣，其中以胃腸炎(或小腸結(jié)腸炎)最為常見，還能引起呼吸道、心腦血管系統(tǒng)、骨骼、結(jié)締組織和全身疾病，甚至引起急性闌尾炎、敗血癥。
許多動(dòng)物都有可能受到小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的感染，幾乎所有家養(yǎng)動(dòng)物都屬于自然感染，其中一部分動(dòng)物，如豬、牛、貓和狗等，被認(rèn)為是小腸菌的健康帶菌者。小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌典型的宿主動(dòng)物是豬（帶菌率最高），有50%的被侵染率。牛的被侵染率也很大，約為7.9%~24.6%。嚙齒類動(dòng)物的攜菌幾率大概在5.2%~10%之間，目前已檢測(cè)出的本身攜帶小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的嚙齒動(dòng)物有30多種。
檢測(cè)方法 [5][6]
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌是重要的人畜共患病微生物，能通過食物傳播。該菌能夠引起多種動(dòng)物以及人的小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌病。正因如此很多國(guó)家規(guī)定，對(duì)于進(jìn)出口的食品該菌是必檢的常規(guī)項(xiàng)目。常規(guī)的檢測(cè)小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的方法操作步驟復(fù)雜，并且費(fèi)時(shí)，一般要 3~7 天，例如2008年頒布的新國(guó)標(biāo)GB/T4789.8-2008是目前主流的檢測(cè)手段，不能達(dá)到快速檢測(cè)食品中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的要求。
傳統(tǒng)檢測(cè)小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的方法包括增菌培養(yǎng)、理化鑒定、血清分析等一系列復(fù)雜過程，且這種方法適用于設(shè)備齊全的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中所用，存在檢測(cè)周期長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備材料時(shí)間長(zhǎng)，不能滿足食品安全檢驗(yàn)市場(chǎng)大批量檢驗(yàn)需求。
隨著技術(shù)的發(fā)展多種分子生物學(xué)方法也被應(yīng)用到小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌快速檢測(cè)中，比如通過檢測(cè)相關(guān)基因來定性分析，或是膠體金免疫法，此類方法檢測(cè)成本高，設(shè)備要求昂貴，并且對(duì)檢測(cè)人員的操作有一定的技術(shù)要求，在食品原材料檢驗(yàn)市場(chǎng)推廣尚有較大難度所以建立一種快速、有效的檢測(cè)食品中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的方法是迫切需要的。
有研究提供一種小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的檢測(cè)方法，包括如下步驟：
步驟一，制備探針分子：根據(jù)小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的基因組結(jié)構(gòu)和保守序列，選取小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的毒力基因ail作為檢測(cè)目標(biāo)片段，根據(jù)GenBank： KT209996.1公開的小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌ail基因序列，設(shè)計(jì)探針分子，所述探針分子序列為5’- CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA-3’，所述探針分子的5’端采用報(bào)告熒光基團(tuán)進(jìn)行標(biāo)記，即探針分子結(jié)構(gòu)為：報(bào)告熒光基團(tuán)- CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA；
步驟二，將聚苯乙烯納米球溶液與步驟一所制得的探針分子：報(bào)告熒光基團(tuán)- CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA混合，然后加入待測(cè)樣品，檢測(cè)熒光。
檢測(cè)方法成本低廉，其是將靶核酸分子特異性結(jié)合探針分子吸附在聚苯乙烯納米球表面，淬滅探針分子的熒光，然后，當(dāng)探針分子與待測(cè)樣品中的DNA分子混合，雜交形成雙鏈時(shí)，探針分子從聚苯乙烯納米球表面脫離，熒光淬滅效應(yīng)消失，通過檢測(cè)熒光信號(hào)實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)樣品的檢測(cè)，根據(jù)熒 光的強(qiáng)度變化還可確定待測(cè)樣品中靶核酸分子的含量。
該方法實(shí)現(xiàn)起來十分簡(jiǎn)單，不需要使用昂貴的PCR儀器以及昂貴的ELISA檢測(cè)試劑，僅需簡(jiǎn)單的熒光檢測(cè)設(shè)備即可實(shí)現(xiàn)結(jié)果的檢測(cè)和分析，檢測(cè)時(shí)間短、靈敏度高，可以廣泛用于食品安全檢測(cè)，特別是基層食品衛(wèi)生監(jiān)督部門的食品安全檢測(cè)。
主要參考資料
[1] 衛(wèi)生學(xué)大辭典
[2] 許文炯, 丁潔, 陳曉蔚, 等. 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌主要毒力基因分析[J]. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào), 2007, 23(7): 675-677.
[3] 張昕, 張惠媛, 汪琦, 等. 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的檢測(cè)[J]. 檢驗(yàn)檢疫科學(xué), 2008, 18(6): 23-26.
[4] 廖遠(yuǎn)泉, 王后偉. 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌研究的一些進(jìn)展[J]. 安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志, 2000, 6(3): 240-240.
[5] CN201710059097.7 一種小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的檢測(cè)方法及其應(yīng)用
[6] CN201810456811.0 一種小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的顯色培養(yǎng)基及其應(yīng)用