介紹^[1]

核酸擴(kuò)增方法應(yīng)用于分子生物學(xué)和重組DNA技術(shù)領(lǐng)域。這些方法用于增加特異核酸序列的拷貝數(shù)，這些特異核酸序列少量存在并常常存在于同時也存在有多種其他核酸序列(包括RNA和DNA)的環(huán)境中。使用核酸擴(kuò)增方法尤其有助于核酸的檢測和定量，其對于診斷例如傳染病、遺傳病和各種類型的癌癥是重要的。核酸擴(kuò)增方法也應(yīng)用于其他領(lǐng)域，在這些領(lǐng)域中研究其中可能微量存在核酸的樣品，例如法醫(yī)學(xué)、考古學(xué)或者確定親權(quán)。等溫連續(xù)方法。

采用這些方法需要四種酶活性來完成擴(kuò)增：依賴RNA的DNA聚合酶活性、依賴DNA地DNA聚合酶活性、RNA酶(H)活性和RNA 聚合酶活性。這些活性中的一些可以聯(lián)合在一種酶中，所以通常只有 2或3種酶是必需的。依賴DNA的RNA聚合酶從含有可被RNA聚合酶識別的啟動子 的DNA模板合成多重RNA拷貝。額外的核酸序列可以存在于目標(biāo)序列的3′和5′末端。

可以通過將下列物質(zhì)放在一起來開始擴(kuò)增反應(yīng)：來自起始材料的該核酸；適當(dāng)?shù)拿?，這些酶一起提供上述的活性；和至少一種(但通常為兩種)寡核苷酸。這些寡核苷酸中至少一種應(yīng)當(dāng)含有RNA聚合酶啟動子的序列。雖然單鏈或雙鏈DNA同樣 可用作輸入材料，但是如果輸入材料為單鏈RNA，則基于轉(zhuǎn)錄的擴(kuò)增方法就特別有用。

經(jīng)過優(yōu)化后的末端加A酶(A-Tailing Enzyme)可以有效地將dAMP摻入平末端DNA片段的3′端。3′-dA DNA產(chǎn)物在隨后的連接步驟中可防止相互形成多聚體。用末端加A酶(A-Tailing Enzyme)模塊加A尾的DNA可以連接到具有互補(bǔ)dT突出端的連接子或克隆載體上。末端加A酶可以將加A尾的DNA連接到具有互補(bǔ)dT突出端的連接子或克隆載體上。

主要參考資料

[1] CN02807706.7 用基于轉(zhuǎn)錄的擴(kuò)增來擴(kuò)增和檢測DNA的方法