高保真PCR酶利用自身的3’→5’外切酶活性（pfu DNA Polymerase，PrimeSTAR HS DNA Polymerase等）能保證PCR產(chǎn)物的保真度，但擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物為不帶A尾的平末端DNA片段，不能直接TA克隆。因此，平末端DNA片段需要進(jìn)行加A后方可TA克隆。平末端DNA加A的步驟一般是先純化PCR產(chǎn)物，加入dATP Buffer利用Taq DNA polymerase在平末端片段后加上A尾后才能與T載體的T頭互補(bǔ)連接TA克隆。步驟較為煩鎖，要購買特定的dATP Buffer。經(jīng)過優(yōu)化后的A-Tailing Enzyme可以有效地將dAMP摻入平末端DNA片段的3′端。3′-dA DNA產(chǎn)物在隨后的連接步驟中可防止相互形成多聚體。

經(jīng)過優(yōu)化后的末端加A酶(A-Tailing Enzyme)可以有效地將dAMP摻入平末端DNA片段的3′端。3′-dA DNA產(chǎn)物在隨后的連接步驟中可防止相互形成多聚體。用末端加A酶(A-Tailing Enzyme)模塊加A尾的DNA可以連接到具有互補(bǔ)dT突出端的連接子或克隆載體上。末端加A酶可以將加A尾的DNA連接到具有互補(bǔ)dT突出端的連接子或克隆載體上。