背景[1-3]
重組人血清白蛋白一種來源于轉基因水稻的重組人血清白蛋白，不含有動物源成分，能為無血清培養(yǎng)基提供更安全的選擇。與胎牛血清（FBS）、血漿來源白蛋白（pHSA）和牛血清白蛋白（BSA）相比，OsrHSA具有更高的純度，更好的批次穩(wěn)定性。同時，OsrHSA也廣泛地在生物醫(yī)藥生產中作賦形劑、穩(wěn)定劑和包埋劑。人血清白蛋白（HSA）作為人血漿中含量最豐富的蛋白，是激素、脂類等物質的轉運載體，其主要生理功能是調節(jié)血漿pH值和維持血漿滲透壓。
人血清白蛋白作為血漿容量擴充劑用途廣泛，是當前的研究熱點之一。人血清白蛋白（Human Serum Albumin，簡稱HSA）是人血漿中的蛋白質。其非糖基化的單鏈多肽包含585個氨基酸，分子量為66kD。
重組人血清白蛋白
人血清白蛋白是人血漿中最豐富的蛋白質，占血漿總蛋白的50%～60%，濃度達38~48g/L，是人體血漿中最主要的蛋白質，維持機體營養(yǎng)與滲透壓，在機體中具有重要的生理功能。肝臟每天約合成12g的白蛋白。HSA屬于一種單鏈無糖基化蛋白質，組成為585個氨基酸，分子量是66.5 kD，等電點介于4.7～4.9。
在體液中人血清白蛋白可以運輸脂肪酸、膽色素、氨基酸、類固醇激素、金屬離子和許多治療分子等：同時維持血液正常的滲透壓。在臨床上人血清白蛋白可用于治療休克與燒傷，用于補充因手術、意外事故或大出血所致的血液丟失，也可以作為血漿增容劑。
應用[4][5]
用于重組人血清白蛋白制備及雙抗體夾心ELISA方法的建立研究
人血清白蛋白（Human Serum Albumin,HSA）是一種由肝細胞合成的可溶性單體蛋白質,占血漿總蛋白的60%,具有多種重要的生理功能,同時也是制藥工業(yè)中不可缺少的輔料之一,作為產品居國際市場血液制劑銷售額的首位。目前臨床應用的HSA主要從人血液中分離,但由于血源缺乏以及潛在的污染風險,基因重組人血清白蛋白成為替代產品的首選。
利用基因重組的方法,在大腸桿菌中表達了人血清白蛋白,并制備了重組人血清白蛋白的多克隆抗體,建立了雙抗體夾心ELISA檢測方法,獲得了以下結果：1.采用RT-PCR的方法從人胚肺二倍體細胞中擴增HSA基因,構建pGEX-4T-1-rHSA原核表達載體,并實現(xiàn)HSA在大腸桿菌中的表達。
結果顯示：擴增出HSA片段為1755bp,符合預期；構建的pGEX-4T-1-rHSA與NCBI上的HSA（登錄號NM000477.5）核苷酸和氨基酸序列同源性均為100%,重組表達載體構建成功；表達產物具有良好的反應原性,能與HSA抗體發(fā)生特異性的結合反應。
2. 表達的重組人血清白蛋白經(jīng)變性、復性及GST瓊脂糖凝膠FF親和層析純化后作為免疫原免疫家兔,制備HSA多克隆抗體。經(jīng)丙烯葡聚糖凝膠層析純化后,應用間接ELISA和Western-blot方法對制備的抗體進行鑒定。結果表明：重組蛋白多數(shù)以包涵體的形式存在,分子量大小約為93kD；重組蛋白具有良好的免疫原性；應用其制備的抗血清效價可達到1：100000；純化的多克隆抗體與表達的重組人血清白蛋白和血漿來源的HSA均能產生特異性結合,具有良好的生物學活性。
3. 利用鼠單抗及制備的兔多抗為基礎,初步建立了HSA的雙抗體夾心ELISA檢測方法；條件為：包被液為0.4μg/mL純化的兔抗人血清白蛋白多克隆抗體；封閉液為1%牛血清白蛋白；酶標抗體為1：20000稀釋的鼠抗人血清白蛋白-HRP；樣品反應時間為60min；酶標抗體作用時間為60min；顯色時間為15min；該方法特異性及重復性較好,線性檢測范圍為0.39mg/mL,為建立快速簡便的HSA檢測方法提供基礎。
研究成功構建了HSA原核表達載體,制備了HSA兔多克隆抗體,建立了基于HSA的雙抗體夾心ELISA檢測方法,為HSA的檢測提供一種方法。
參考文獻
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[4]Cell adhesion molecules and insulin-like growth factor-1 in vascular disease[J].Sandhya K.Balaram,Devendra K.Agrawal,R.Todd Allen,Charles A.Kuszynski,John D.Edwards.Journal of Vascular Surgery.1997(5)
[5]李向茸.重組人血清白蛋白制備及雙抗體夾心ELISA方法的建立[D].西北民族大學,2014.