背景及概述[1][2][3]
舍雷肽酶又稱沙雷肽酶，早期被人們發(fā)現(xiàn)具有蛋白溶解能力，可抑制致炎物質，多被用作化痰去膿藥，同時舍雷肽酶也具有促進細胞的新生，促進傷口的愈合，與抗生素一同使用時有協(xié)同作用提高抗生素抗菌作用。所以是創(chuàng)傷藥的良好選擇。該酶的發(fā)現(xiàn)者Dr Hans稱該酶為“奇跡之酶”，它具有良好的抗炎、抗腫脹、促進痰液、膿液溶解與排泄以及鎮(zhèn)痛作用，臨床用于手術后及外傷的消炎；副鼻竇炎、乳汁潴留性乳腺炎、膀胱炎、附睪炎、智齒周圍炎及牙槽膿腫時的消炎；以及治療支氣管炎、肺結核、支氣管哮喘時痰液不易咳出等。
研究也表明，舍雷肽酶具有出色的纖溶活性，使其在治療動脈粥樣硬化方面也有潛在的應用。目前舍雷肽酶主要生產菌種是粘質沙雷氏菌E15菌株，該菌株是從日本蠶蛹內臟中篩選得到，蠶蛹就是利用該酶破壞繭殼，從而化蛹成蛾。粘質沙雷氏菌又名靈桿菌，是革蘭氏陰性兼性厭氧桿菌，屬于腸桿菌科(Enterobacteriaceae)沙雷氏菌屬 (Serrtia)。該菌的特征在28～30℃下培養(yǎng)產生鮮紅的色素—靈菌紅素(prodigiosin，又稱靈桿菌素)；37℃下培養(yǎng)不產生紅色色素，靈菌紅素具有抗菌、抑癌、提高免疫力等生理 活性，具有一定的開發(fā)潛質。近些年來，舍雷肽酶在作為藥物在臨床的使用量逐年增長，國內外市場需求量非常大，而且售價較高，國內舍雷肽酶類藥物的原料多從國外進口，生產的企業(yè)屈指可數(shù)，也未見相關發(fā)酵工藝研究的報道。目前，日本和印度工業(yè)化生產規(guī)模較大，國際市場多向這兩個國家采購，所以國內迫切需要開發(fā)具自主知識產權的舍雷肽酶生產工藝。
規(guī)格[4]
腸溶片： 100μg/5mg。
用法用量[4]
口服： 成人15～30mg/d，分3次餐后服用。
應用[4]
本品臨床適用于術后、外傷的消腫、消炎和鎮(zhèn)痛，以及五官、口腔、乳腺、膀胱、附睪、肺、支氣管炎病人炎癥水腫癥狀的改善。
藥理作用 [5]
本品是沙雷菌所產生的蛋白酶。通過降解異常滲出物和蛋白質以促進血管、淋巴管對分解產物的吸收，改善炎癥病灶的循環(huán)，從而產生消炎消腫的作用。通過降解和液化粘膜分泌物及纖維凝塊，加速痰、膿和血腫液化與排出。對纖維蛋白、纖維蛋白原有很強的溶解能力，但對白蛋白α及γ球蛋白等活性蛋白無害。連續(xù)使用本品，能促進青霉素、氨芐青霉素、磺芐青霉素等抗生素的組織穿透能力，增加抗生素在感染病灶和血中的濃度，增強抗生素的作用。
藥代動力學[6]
口服本藥后，血液及淋巴組織的達峰時間約1小時，維持作用時間約4-5小時。可廣泛分布于淋巴、支氣管、肺、膀胱、血液等組織及體液中，以淋巴組織中濃度最高。淋巴組織及血液中的濃度一般與劑量成正比，淋巴組織中藥物濃度較血藥濃度持久。本品可在體內代謝，主要代謝物及部分原形藥物自尿或糞便中排泄。
不良反應[6]
本品偶見以下不良反應：過敏反應：如皮疹、瘙癢、皮膚潮紅等；消化道反應：如食欲不振、胃部不適、惡心、嘔吐、腹瀉等；其他：如鼻出血、痰中帶血等出血癥狀，以及出現(xiàn)黃疸、谷氨酸草酰乙酸轉氨酶(AST)、谷氨酸丙酮酸轉氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酸丙酮酸轉氨酶(γ-GTP)等上升。
注意事項[7]
1. 過敏性反應，有時出現(xiàn)皮疹，皮膚潮紅等癥狀，出現(xiàn)此等過敏癥狀時應停藥。
2. 血液凝固異常者、嚴重肝腎障礙者慎用。
3. 對高齡患者，由于生理機能下降，可酌情減少用量。
4. 本品與抗凝血藥合用，有時會增加抗凝血藥的作用，應注意觀察，慎重給藥。
藥物相互作用[6]
1. 因本品可強效溶解纖維蛋白和纖維蛋白原，從而增強抗凝藥的作用，所以與抗凝藥聯(lián)合使用時應慎重，已使用者應注意密切觀察。
2. 本品與抗生素類藥、化療藥、非甾體類抗炎藥并用可引起下列反應：皮膚粘膜眼綜合征及中毒性表皮壞死癥，發(fā)生率＜0.1%；間質性肺炎、嗜酸細胞肺浸潤綜合征，發(fā)笙率＜0.1%；休克，發(fā)生率＜0.1%。
制備[3]
將粘質沙雷氏菌LL-413菌株接種入產酶培養(yǎng)基，于28～32℃、200～250r/min發(fā)酵20～42h，得干菌體濃度為2.67～9.40g/L，舍雷肽酶活力為360.0～1505U/mL的發(fā)酵液，發(fā)酵液經過離心后去除菌體，上清液再經過鹽析、透析和冷凍干燥后，即可得到舍雷肽酶；所述產酶培養(yǎng)基終濃度組成為：酵母浸出粉5～11g/L，牛肉膏3.0～6.6g/L，麥芽浸粉10.0～12.2g/L，MgSO4 1g/L，NaCl 5g/L，溶劑為水，初始pH為7.5～8.5。所述粘質沙雷氏菌LL-413菌株在產酶培養(yǎng)前，通常需要先經斜面活化培養(yǎng)，然后經種子培養(yǎng)、獲得種子液再接入產酶培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，具體步驟如下：(1)將粘質沙雷氏菌LL-413菌株接種于斜面培養(yǎng)基，于30℃培養(yǎng)24～36h，得到活化后的斜面菌體；所述的斜面培養(yǎng)基終濃度組成為：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，NaCl 5g/L，瓊脂20g/L，溶劑為水，初始pH為7.0；(2)將步驟(1)活化后的斜面菌體接種至種子培養(yǎng)基中，于30℃、200～250r/min振蕩條件下培養(yǎng)18～24h，得到種子液；所述種子培養(yǎng)基終濃度組成為：蛋白胨10g/L，牛肉膏 3g/L，NaCl 5g/L，溶劑為水，初始pH為7.0；(3)將步驟(2)種子液以體積濃度1％～2％的接種量，移種到產酶培養(yǎng)基中，于30 ℃、200～250r/min振蕩條件下培養(yǎng)24～42h，得到含舍雷肽酶的發(fā)酵液；所述產酶培養(yǎng)基終濃度組成為：酵母浸出粉5～11g/L，牛肉膏3.0～6.6g/L，麥芽浸粉10.0～12.2g/L，MgSO4 1g/L，NaCl 5g/L，溶劑為水，培養(yǎng)基初始pH為7.5～8.5。
舍雷肽酶粗酶液進行分離純化的方法為：將粘質沙雷氏菌LL-413菌株發(fā)酵所得的舍雷肽酶粗酶液，經過硫酸銨(NH4SO4) 沉淀、透析除鹽和冷凍干燥后獲得舍雷肽酶。具體的，所述分離純化方法如下：
1)往舍雷肽酶粗酶液中加入硫酸銨，使其飽和度達到30～45％，4℃沉淀12～ 24h，之后將粗酶液于4℃、8000g條件下離心10min，去除沉淀，保留上清液；
2)往步驟(1)中經硫酸銨沉淀后所得的上清液中再次加入硫酸銨，使其飽和度達 到70～80％，4℃沉淀12～24h，之后將粗酶液于4℃、8000g條件下離心10min，棄去上清液，沉淀物用pH值8.0的Tris-HCl緩沖液溶解，此時得到舍雷肽酶粗品的濃縮液；
3)將步驟(2)所得濃縮液裝入截留分子量為14kDa的透析袋中，以去離子水為透 析液透析除鹽后，于-40℃冷凍干燥，即得到舍雷肽酶凍干酶粉。
由LL-413菌株發(fā)酵制備的舍雷肽酶的電泳圖，泳道1：標準蛋白Marker；泳道2：舍雷肽酶樣品：
主要參考資料
[1] 溫文勝, 黃光武, 吳鴻泉, 等. 沙雷肽酶對慢性鼻竇炎鼻竇黏膜中纖維蛋白分解酶活性的影響[J]. 廣西醫(yī)科大學學報, 2002, 19(6): 827-828.
[2] CN201810231020.8 一種舍雷肽酶外用粉劑及其制備方法
[3] CN201610407429.1 粘質沙雷氏菌LL-413菌株及其制備舍雷肽酶的應用
[4] 臨床常用藥物
[5] 常用新藥手冊
[6] 舍雷肽酶腸溶片說明書
[7] 最新全科醫(yī)師用藥手冊