背景 ^[1][2]

Recombinant Rat GDNF（膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子）屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β超家族成員，它的成熟蛋白質(zhì)由134個(gè)氨基酸殘基組成。膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是目前發(fā)現(xiàn)的特異性最強(qiáng)的多巴胺神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)因子，同時(shí)又是一種運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)因子。這表明，膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子具有治療一些難治的神經(jīng)神經(jīng)系統(tǒng)疾病如帕金森病，脊髓側(cè)索硬化癥的臨床應(yīng)用前景。

Recombinant Rat GDNF首先由Lin等于1993年從大鼠B49細(xì)胞中分離、純化而得，其顯著的生物學(xué)功能是促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，尤其對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的作用比較專一。對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞也有很強(qiáng)的營(yíng)養(yǎng)作用，此外，對(duì)交感神經(jīng)元、感覺(jué)神經(jīng)元等也有一定的作用。膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在發(fā)育個(gè)體中的分布較為廣泛，中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、肌肉組織等都有分布，提示其在發(fā)育個(gè)體中具有較為廣泛的作用。然而，機(jī)體中膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分布雖然廣泛，但含量極低，為了對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的功能，結(jié)構(gòu)作進(jìn)一步的研究，需要足夠量的膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，故從人多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞提取總RNA，利用RT-PCR技術(shù)，分離了膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因，并在大腸桿菌中獲得高效表達(dá)。

Recombinant Rat GDNF的受體^[4]

到目前為止，對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的受體仍不完全清楚。膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子雖屬于TGF－βs的一個(gè)新成員，此家族的成員是通過(guò)寡聚1型絲氨酸一蘇氨酸激受體而起作用的。膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是否使用此受體仍未見(jiàn)報(bào)道。相反，許多實(shí)驗(yàn)顯示膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因缺陷鼠與酪氨酸激酶孤兒受體c－Ret缺陷鼠的表型非常相似叫，這些表型包括缺乏腸源性神經(jīng)、腎畸型等，提示膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子很可能使用c－Ret受體。

但c－Ret受體不是膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體的全部，它僅是一個(gè)亞單位。與膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子直接結(jié)合的是另一亞單位，一種新的糖基磷脂酰肌醇連接蛋白，稱 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子R－α。此蛋白通過(guò)連接糖基磷脂酰肌醇固定在細(xì)胞膜的表面，它能識(shí)別膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子并與之結(jié)合。實(shí)驗(yàn)顯示：只有在膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子R-α存在下，DA神經(jīng)元オ對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子起反應(yīng)，但單有膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子R－α而缺少c－Ret，盡管加了膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，也檢測(cè)不到細(xì)胞膜蛋白復(fù)合物形成的信號(hào)，只有膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子R-α和c－Ret同時(shí)存在，膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子才能發(fā)揮作用。因此c－Ret被認(rèn)為是膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子－β?？傊z質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體是一個(gè)多亞單位組成的復(fù)合體，除了上述提到的兩亞單位外，可能還存在 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子R-γ。

Recombinant Rat GDNF的表達(dá)^[3]

膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子蛋白的表達(dá) (免疫組織化學(xué)染色×200) Fig.3 The expression of 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 prote(Immunohistochemistry×200)

A:膠質(zhì)瘤Ⅱ級(jí), 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子蛋白陽(yáng)性表達(dá);B:膠質(zhì)瘤Ⅲ級(jí), 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子蛋白陽(yáng)性表達(dá);C:膠質(zhì)瘤Ⅳ級(jí), 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子蛋白陽(yáng)性表達(dá);D:癌旁組織, 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子蛋白陽(yáng)性表達(dá)。

Recombinant Rat GDNF的純化^[1]

大批誘導(dǎo)的JM103菌超聲破碎、洗滌后溶于8ml/L尿素，上sephacryls-200柱，所收集的樣品經(jīng)SDS-PAGE考馬斯亮藍(lán)染色分析，除膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子特異條帶外，無(wú)其他條帶，薄層掃描結(jié)果可見(jiàn)純度達(dá)90%以上。

參考資料

[1]大鼠膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的基因克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)[J]. 陳哲宇,何成,王成海,路長(zhǎng)林.  神經(jīng)科學(xué). 1997(01)

[2]膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因的克隆及其在大腸桿菌中的高效表達(dá).王金惠，王嘉璽.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊.1999

[3]膠質(zhì)瘤中KI67和膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)及其臨床意義史永志.楊張凱,史航宇,西安市兒童醫(yī)院神經(jīng)外科.

[4]膠源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子)的結(jié)構(gòu)與功能.阮奕文，姚志彬，生命科學(xué).