背景[1]
Recombinant Rat IL-33是IL-1家族的新成員， 可以從內(nèi)皮靜脈細(xì)胞中分離獲得, 該因子與Th2型反應(yīng)密切相關(guān)。ST2為IL-1受體超家族的成員。Schmitz等發(fā)現(xiàn)Recombinant Rat IL-33是ST2的特異性配體。IL-33與ST2結(jié)合促使Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生, 從而參與Th2型反應(yīng)的發(fā)生。研究表明, 當(dāng)小鼠暴露于鏈格孢菌 (Alternaria alternata) 環(huán)境中時(shí), 鏈格孢菌將誘導(dǎo)Recombinant Rat IL-33快速釋放入氣道管腔, 出現(xiàn)Th2型反應(yīng)，具有生物活性的Recombinant Rat IL-33存儲(chǔ)于人氣道上皮細(xì)胞核內(nèi)。
Recombinant Rat IL-33特性[1]
在體外, 將這些上皮細(xì)胞暴露于鏈格孢菌, 可促使Recombinant Rat IL-33釋放到細(xì)胞外, 也誘導(dǎo)危險(xiǎn)信號(hào)分子ATP在細(xì)胞外累積;自分泌的ATP將持續(xù)增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度, 通過(guò)激活P2嘌呤受體釋放IL-33。在鏈格孢菌引起的小鼠氣道炎癥模型中, 嘌呤受體的抑制劑或P2Y2基因缺失將抑制IL-33釋放和Th2型反應(yīng), 這也突出了ATP和P2Y2受體的重要作用。IL-33/ST2信號(hào)傳導(dǎo)通路與典型的Th2類細(xì)胞因子有所不同。IL-33一般是與胞膜上IL-1RAc P和ST2結(jié)合, 然后結(jié)合成一個(gè)異二聚體, 電信號(hào)通過(guò)該二聚體傳導(dǎo)至細(xì)胞內(nèi), 同時(shí)募集IL-1受體相關(guān)激酶 (IL-1 receptorassociated kinase, IRAK) 、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子 (tumor necrosis factor receptor-associated factor, TRAF6) 和髓樣分化因子 (myeloid differentiation factor 88, My D88) 等下游信號(hào)分子, 并激活下游絲裂原活化蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinases, MAPKK) , MAPKK則反過(guò)來(lái)通過(guò)cjun N端激酶 (c-Jun N-terminal kinase, JNK) 激活蛋白-1 (activator protein-1, AP-1) 。TRAF6還能激活核因子-kappa B (NF-κB) , 誘導(dǎo)IL-4、IL-5和IL-13等Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
Recombinant Rat IL-33的生物學(xué)活性檢測(cè)[2]
將商業(yè)化途徑獲得的Recombinant Rat IL-33及純化制備的Trx/IL-33與成熟形式IL-33從50ng/μl開(kāi)始倍比稀釋, 刺激培養(yǎng)的Raw264.7巨噬細(xì)胞, 通過(guò)ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中TNF-α水平。以Recombinant Rat IL-33標(biāo)準(zhǔn)品刺激結(jié)果繪圖作為代表顯示Recombinant Rat IL-33刺激Raw264.7產(chǎn)生TNF-α的劑量效應(yīng) (圖5) 。結(jié)果顯示, IL-33標(biāo)準(zhǔn)品、Trx/IL-33融合蛋白、成熟形式IL-33的EC50值分別為3.037 ng/ml、12.97 ng/ml、1.186 ng/ml, 表明純化的IL-33成熟蛋白具有與商業(yè)化重組IL-33相當(dāng)?shù)募?xì)胞生物學(xué)活性。
小鼠不同粘膜組織樣品中HBc Ag特異的Ig A水平[2]
采集經(jīng)滴鼻免疫小鼠的支氣管肺泡灌洗液 (BALF) , 血清, 陰道灌洗液, 腸灌洗液樣品, 以ELISA檢測(cè)HBc Ag特異的Ig A水平。結(jié)果顯示 (圖6) , HBc Ag作為模式抗原經(jīng)鼻免疫小鼠后, 在不同粘膜組織及血清中都誘導(dǎo)產(chǎn)生了特異的Ig A抗體應(yīng)答。以Recombinant Rat IL-33作為佐劑, 可以增強(qiáng)HBc Ag特異的Ig A的水平, 經(jīng)Student t檢驗(yàn)分析表明在BALF中IL-33顯著增加了HBc Ag特異的Ig A水平, 具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05, n=4/組) 。
參考文獻(xiàn)
[1] 白細(xì)胞介素-33在過(guò)敏性哮喘小鼠體內(nèi)的變化及作用.柴強(qiáng),宋紅玉,李朝品.
[2]重組小鼠白細(xì)胞介素-33的原核表達(dá)制備及其粘膜免疫佐劑活性.馮雪軍,龍瓊,唐增華,黃惟巍.