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倍硫磷的檢測

2020/10/26 11:48:35

背景及概述[1][2]

倍硫磷又名百治屠 (tiguvon)。廣譜、低毒有機磷殺蟲劑。殺蟲作用比敵百蟲強,對人、畜毒性較低,無蓄積作用,性質穩(wěn)定,維持藥效長。是殺滅牛皮蠅蚴的特效藥,對移行期第二期蚴蟲也有效,但蚴蟲移行至脊髓階段要避免用藥,否則會引起癱瘓。亦用于殺滅虱、蜱、蠅等。用噴淋或背部澆潑等方法給藥。

純品為無色油狀液體,工業(yè)品為黃棕色油狀液體。商品為50%乳劑,具蒜臭味。對光、熱、堿較穩(wěn)定,可與弱堿性農藥混用,但應隨配隨用。具觸殺、胃毒作用,并稍具內吸作用,殘效期較長。對高等動物的毒性中等,對大白鼠的口服致死中量為216mg/kg。每畝用50%乳劑100~150g(稀釋800~1000倍)對茶葉象甲和綠鱗象甲有較好防治效果。安全間隔期暫定為10~15天。

檢測[3]

倍硫磷(Fenthion)屬有機磷殺蟲劑,結構為毒性中等,殺 蟲譜寬,殘效期長,使用廣泛。倍硫磷殘留對人、畜等具有一定危害性,倍硫磷的大量推廣使用,必然會給環(huán)境衛(wèi)生和農產品安全帶來危害。因此世界各國都對倍硫磷在農產品中的允許殘留量作了嚴格地規(guī)定,我國也不例外。目前倍硫磷檢測方法主要是傳統(tǒng)的色譜法,該方法對機器依賴性強,成本高,操作復雜,分析時間長,難以滿足高通量、快速、在線檢測的要求。

CN200710021377.5針對現(xiàn)有色譜儀器技術中的倍硫磷檢測方法操作較復雜、檢測費用較高、檢測效率低下的缺陷,提供倍硫磷ELISA檢測方法,為倍硫磷農藥殘留找到一種既快速準確又簡單低廉的超微量檢測方法。對倍硫磷農藥的殘留量進行檢測,準確度高、靈敏度高、簡單、快速、低廉。檢測方法包括:

(1)倍硫磷多克隆抗體制備

采用倍硫磷人工抗原的免疫原“倍硫磷-牛血清白蛋白偶聯(lián)物”,常規(guī)免疫方 法免疫新西蘭白兔,制備得到地抗倍硫磷的兔抗血清即為倍硫磷多克隆抗體;

(2)包被

采用倍硫磷人工抗原的包被抗原“倍硫磷-卵清蛋白偶聯(lián)物”1.2μg/mL在微 量分析板中每孔加50μL,4℃冰箱過夜,倒凈,以常規(guī)洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩 沖液洗滌3~6次并倒置、在吸水紙上拍干;

(3)封閉

1%明膠作封閉物,微量分析板每孔100μL,37℃反應1小時,倒凈,以常規(guī) 洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩沖液洗滌3~6次并倒置、在吸水紙上拍干;

(4)加抗體及抗體與待測樣品的混合液

用稀釋8000倍的倍硫磷抗血清與待測樣品和空白抗原抗體反應溶液即常規(guī) 磷酸鹽-吐溫緩沖液等體積充分混合,后以每孔50μL加到微量分析板中,37℃反 應1小時,倒凈,以常規(guī)洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩沖液洗滌3~6次并倒置、在 吸水紙上拍干;

(5)加酶標二抗

用pH7.4、0.15mol/L的常規(guī)洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩沖液將商品化的HRP- 羊抗兔IgG稀釋2000倍,微量分析板每孔加50μL,37℃反應1小時,倒凈,以 常規(guī)洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩沖液洗滌3~6次并倒置、在吸水紙上拍干;

(6)顯色

微量分析板每孔加50μL的四甲基聯(lián)苯胺底物溶液,37℃顯色反應10分鐘

(7)終止反應并讀數(shù)

加2mol/L的硫酸,微量分析板每孔加25μL,終止顯色反應,酶聯(lián)儀上450nm 處讀出吸光值,空白基質作陽性對照吸光值Bo,待測樣品吸光值B;

(8)數(shù)據(jù)處理

計算出結合率B/Bo及Logit(B/Bo),

Logit(B/Bo)=Ln[(B/Bo)/(1-B/Bo)]    公式1

代入如下檢測方程:

Logit(B/Bo)=-0.7575LogC-1.4928    公式2

其中C為微量分析板孔中測得的倍硫磷濃度,通過公式1和公式2可以求得;

X=n×2C,n為反應前樣品被稀釋的倍數(shù)    公式3

待測樣品中以濃度X表示的倍硫磷殘留量可通過公式3求得。

上述倍硫磷農藥殘留量ELISA檢測方法中,抗原抗體反應液磷酸鹽-吐溫緩沖 液中甲醇含量為5%、pH值為7.4、離子強度為0.15mol/L,微量分析板中每孔50μL。公式2可由倍硫磷系列標準濃度的競爭曲線進行校正。

應用[2]

為廣譜低毒有機磷殺蟲藥,是防治畜禽外寄生蟲病的主要藥物。通過觸殺和胃毒作用方式進入蟲體,殺滅宿主體內外寄生蟲。殺滅作用比敵百蟲強5倍。除了對馬胃蠅蚴、家畜胃腸道線蟲以及虱、蜱、蚤、蚊、蠅等有殺滅作用外,對牛皮蠅蚴有特效(無論是第三期蚴,還是第二期蚴),在牛皮蠅產卵期使用,可取得良好的效果。

由于性質穩(wěn)定,一次用藥可維持藥效2個月左右。對人、畜的毒性較低,大鼠內服LD50為177~375mg/kg,皮下注射為345~410mg/kg。在體內無蓄積作用,給乳牛用藥后,奶中殘留量極低,可用于乳牛,但應在用藥6小時后再行擠奶。用于殺滅牛皮蠅蚴,除對一般藥物有效的第三期蠅蚴有效外,對移行期蠅幼也有效;殺滅家畜體表虱、蜱、蚤、蚊、蠅等。

主要參考資料

[1] 中國茶學辭典

[2] 新編獸藥實用手冊

[3] CN200710021377.5 農藥倍硫磷殘留免疫檢測方法

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