背景[1-3]
大鼠髓過氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中大鼠髓過氧化物酶（MPO）的含量。
實驗原理:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠髓過氧化物酶（MPO）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠髓過氧化物酶（MPO）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
大鼠髓過氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒
樣本處理及要求
1.血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
[實驗結果計算]
以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
應用[4][5]
用于髓過氧化物酶在高脂血癥大鼠心肌缺血/再灌注損傷中的意義研究
利用食源性高脂血癥大鼠模型,建立在體大鼠心肌缺血/再灌注模型,分析高脂血癥是否導致大鼠心肌對缺血/再灌注損傷敏感性增加;如果是,這種敏感性的增加是否與高脂血癥大鼠缺血/再灌注后缺血區(qū)心肌組織髓過氧化物酶（MPO）表達及活性異常增高相關。
方法:選用雄性Wistar大鼠,實驗動物隨機分為3組:①正常飲食組（18只）,普通飼料飼養(yǎng)8周:②高脂飲食組（18只）,高脂飼料飼養(yǎng)8周,缺血/再灌注術前連續(xù)3天腹腔注射藥物溶劑（DMSO）;③高脂飲食+氨苯砜組（18只）,高脂飼料飼養(yǎng)8周,缺血/再灌注術前連續(xù)3天腹腔注射氨苯砜（MPO清除劑,100μmol/kg,一次/天）。結扎大鼠左冠狀動脈前降支缺血30分鐘,再灌注3小時;同時在體監(jiān)測各項心功能指標:利用血脂試劑盒檢測血脂水平;以Evence blue和TTC復染法測定心梗面積;以TUNEL染色和caspase-3活性反應心肌細胞凋亡;分別以酶聯(lián)免疫吸附法及免疫組化法檢測心肌組織MPO的水平和分布。
結果1.食源性大鼠高脂血癥動物模型的建立:高脂大鼠體重4周達277±12g、8周達423±36g,較正常飲食組大鼠明顯升高。高脂大鼠4周血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平較4周前顯著提高,明顯高于同期普通飲食大鼠。
2. 高脂血癥大鼠心肌缺血/再灌注損傷敏感性增加:與正常心肌缺血/再灌注組比較,高脂組大鼠心肌缺血/再灌注后9個時間點的心功能(收縮指數(shù)CI=dp/dtmax/IP;+dp/dtmax)均有明顯下降（P＜0.05）、心梗面積增大（35±29%vs.56±6%,P＜0.05）、心肌細胞凋亡指數(shù)（15±3%vs.22±2%,P＜0.05）升高以及caspase-3比活性升高（P＜0.05）。
3. 高脂血癥大鼠心肌缺血/再灌注后缺血區(qū)MPO沉積增多、活性升高:與正常心肌缺血/再灌注組比較,高脂血癥大鼠缺血區(qū)心肌組織MPO大量沉積、活性顯著升高（168±13.4 U/100 mg濕組織vs.206±15.6 U/100 mg濕組織,P＜0.05）。
4. 高脂血癥大鼠心肌缺血/再灌注后MPO活性與心肌損傷指標呈正相關:心肌梗塞面積與MPO活性呈正相關,相關系數(shù)為r=0.706,P＜0.01;凋亡指數(shù)與MPO活性呈正相關,r=0.685,P＜0.01;caspase-3活性與MPO活性呈正相關,r=0.739,P＜0.01。提示,高脂血癥大鼠心肌對缺血/再灌注損傷易感性升高可能與缺血區(qū)心肌組織異常高表達的MPO相關,即MPO可能參與并加重了高脂血癥大鼠心肌缺血/再灌注損傷。
5.清除MPO后,高脂血癥大鼠缺血/再灌注后心肌損傷減輕,進一步闡明高脂血癥大鼠缺血/再灌注后缺血區(qū)心肌組織MPO表達及活性升高可能是高脂血癥大鼠心肌對缺血/再灌注損傷敏感性增加的關鍵因素之一。
參考文獻
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[2]Genetic Modulation of PPARγPhosphorylation Regulates Insulin Sensitivity[J].Shamina M.Rangwala,Ben Rhoades,Jennifer S.Shapiro,A.Sophie Rich,Jason K.Kim,Gerald I.Shulman,Klaus H.Kaestner,Mitchell A.Lazar.Developmental Cell.2003(4)
[3]Peroxisome proliferator-activated receptors:regulation of transcriptional activities and roles in inflammation[J].Christophe Blanquart,Olivier Barbier,Jean Charles Fruchart,Bart Staels,Corine Glineur.Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology.2003(2)
[4]Blocking the development of postischemic cardiomyopathy with viral gene transfer of the apoptosis repressor with caspase recruitment domain[J].Subhasis Chatterjee,Lawrence T Bish,Vasant Jayasankar,Allan S Stewart,Y.Joseph Woo,Michael T Crow,Timothy J Gardner,H.Lee Sweeney.The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery.2003(6)
[5]裴榮.髓過氧化物酶在高脂血癥大鼠心肌缺血/再灌注損傷中的意義[D].山西醫(yī)科大學,2007.