背景[1-3]
人胰島素受體底物2(IRS-2)ELISA KIT用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中胰島素受體底物2(IRS-2)含量。
實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中胰島素受體底物2(IRS-2)水平。用純化的胰島素受體底物2(IRS-2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胰島素受體底物2(IRS-2)，再與HRP標(biāo)記的胰島素受體底物2(IRS-2)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素受體底物2(IRS-2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中胰島素受體底物2(IRS-2)濃度。
人胰島素受體底物2(IRS-2)ELISA KIT
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1.收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。正常標(biāo)本測定前用標(biāo)本稀釋液作1：1 0稀釋（取2 0ul，加標(biāo)本稀釋液18 0ul,稀釋1 0倍）。
2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成2 0 000U/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在管中加入2000 0 U/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。
3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:1 0倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
檢測程序
1.加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。
2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。
3.每孔中加入抗體工作液10 0ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃6 0分鐘。
4.洗板：同前。
5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃3 0分鐘。
6.洗板：同前。
7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8.每孔加入100ul終止液混勻。
9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在45 0 nm處測吸光值。
結(jié)果計算與判斷
1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。
2.以標(biāo)準(zhǔn)品20 00、100 0、500、250、125、62.5、31.2、0 U/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)OLab含量，再乘上稀釋倍數(shù)1 0即可。
應(yīng)用[4][5]
用于慢性間歇性低氧對大鼠腎臟葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2及胰島素受體底物2表達(dá)的影響研究
根據(jù)OSAHS的病理生理特征建立一個符合其特征的慢性間歇性低氧實(shí)驗(yàn)動物模型,為研究睡眠呼吸疾病提供一個可靠的實(shí)驗(yàn)平臺。通過建立慢性間歇性低氧及復(fù)氧的動物模型,探討慢性間歇性低氧所致的脂肪因子以及復(fù)氧對大鼠糖代謝及腎臟葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2（GLUT-2）、胰島素受體底物2（IRS-2）表達(dá)的影響。方法:將24只SD雄性成年大鼠隨機(jī)分為對照組（control）,慢性間歇性低氧組（CIH）,復(fù)氧組（RH）。
CIH組和RH組在慢性間歇性低氧的動物模型中每天造模8h,持續(xù)4周,RH組的大鼠在常規(guī)下飼養(yǎng)3周,在建模結(jié)束時抽取大鼠動脈血立即行血?dú)夥治?。空?2h后靜脈取血離心取上清液后用過氧化物酶法檢測血清中血糖及放射免疫法檢測大鼠血清胰島素,ELISA法檢測血清瘦素（leptin）和游離脂肪酸（FFA）。取出大鼠腎臟組織,q PCR法檢測大鼠腎臟GLUT-2、IRS-2的m RNA表達(dá),Western blotting法檢測GLUT-2、IRS-2蛋白表達(dá);免疫組化法檢測大鼠腎臟GLUT-2、IRS-2蛋白表達(dá)。
結(jié)果:1.control組大鼠血氧飽和度≥95%,CIH組的血氧飽和度≤85%,RH組血氧飽和度≥86%;
2. CIH組大鼠空腹血糖、血清胰島素、胰島素抵抗指數(shù)較control組、RH組明顯升高（P＜0.05）;RH組高于control組（P＜0.05）;
3. Leptin、FFA在CIH的濃度高于control組和RH組,（P＜0.05）;RH組高于control組,（P＜0.05）;
4. GLUT-2、IRS-2的m RNA表達(dá)在CIH組高于control組和RH組,（P＜0.05）;RH組高于control組,（P＜0.05）;
5. CIH組的GLUT-2、IRS-2的蛋白表達(dá)較control組和RH組升高（P＜0.05）;RH組高于control組（P＜0.05）；
結(jié)論:慢性間歇性低氧升高大鼠空腹血糖、胰島素、leptin及FFA,上調(diào)大鼠腎臟GLUT-2、IRS-2的表達(dá),增強(qiáng)胰島素抵抗,降低胰島素敏感性。
參考文獻(xiàn)
[1]Circulating Endocannabinoids and Insulin Resistance in Patients with Obstructive Sleep Apnea[J].Xiaoya Wang,Qin Yu,Hongmei Yue,Jiabin Zhang,Shuang Zeng,Fenfen Cui,Hanrui Zhang.BioMed Research International.2016
[2]Obstructive sleep apnea is independently associated with inflammation and insulin resistance,but not with blood pressure,plasma catecholamines,and endothelial function in obese subjects[J].Luciene da Silva Araújo,Julia Freitas Rodrigues Fernandes,Márcia Regina Simas Torres Klein,Antonio Felipe Sanjuliani.Nutrition.2015(11-1)
[3]Sleep Fragmentation During Late Gestation Induces Metabolic Perturbations and Epigenetic Changes in Adiponectin Gene Expression in Male Adult Offspring Mice[J].Khalyfa,Abdelnaby,Mutskov,Vesco,Carreras,Alba,Khalyfa,Ahamed A,Hakim,Fahed,Gozal,David.Diabetes.2014(10)
[4]Sleep Apnea-Hypopnea Syndrome and Type 2 Diabetes.A Reciprocal Relationship?[J].Elisabet Martínez Cerón,Raquel Casitas Mateos,Francisco García-Río.Archivos de Bronconeumología（English Edition）.2014
[5]余維.慢性間歇性低氧對大鼠腎臟葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2及胰島素受體底物2表達(dá)的影響[D].重慶醫(yī)科大學(xué),2017.