因為蛋白酶具有不同的種類和專一性。蛋白酶可以根據(jù)不同的標準進行細分。以催化機制分，有三種不同的類型：絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、金屬-蛋白酶。以進攻底物的方式分為內(nèi)、外蛋白酶。第三種標準是變化的底物的專一性，如胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶類的酶。

對于適合的實驗，必須考慮到這些劃分。特別是當(dāng)檢測新的蛋白酶時，首先要決定的是，測試酶的專一性還是鑒別蛋白質(zhì)分裂活性的光譜范圍。前者需要特殊的底物，而后者采用許多種蛋白質(zhì)，對于它們用量很大，因此必須找到能夠檢測分裂產(chǎn)物的方法。以下，首先描述檢測一般蛋白酶活性的方法，然后是特殊的蛋白酶和肽酶。

蛋白酶活性分析方法^[1]

1、Anson測定法原理

血紅蛋白不是很貴，被用來做這個實驗。由于處于天然結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)通?？梢缘种频鞍酌傅墓?，因此首先用尿素使血紅蛋白失活。分離非水解蛋白質(zhì)后，利用 Folin-Ciocaheau 試劑的上清液測量消化產(chǎn)物。這種試劑優(yōu)先識別色氨酸和酪氨酸，但是也可以識別半胱氨酸和組氨酸。實驗溫度取決于酶的專一性，為了穩(wěn)定酶的活性，溫度可從室溫（25℃）變化到 50℃。

2、酪蛋白測定法原理

實驗中的氨基酸由蛋白酶從酪蛋白中水解下來。在分離出 TCA 沉淀中未分解的蛋白質(zhì)后，用分光光度測定的方法對其上清液分析，氨基酸來自于酪蛋白。依據(jù)酪蛋白校準曲線，已對其量化。這個鑒定不是很敏感。

3、偶氮酪蛋白測定法原理

酪蛋白的敏感性鑒定可以通過這個實驗得到很大程度的改善。含氮的基團與酪蛋白的共價鍵被蛋白水解時切斷，用 TCA 上清液測定它們的顏色變化。

4、茚三酮測定法原理

茚三酮反應(yīng)是一種靈敏度高的蛋白實驗。游離的氨基酸可以被高敏感性檢測出來。這個方法可以被用來繼續(xù)蛋白質(zhì)的酶降解。上述的酪蛋白降解在這個實驗系統(tǒng)中用作蛋白酶反應(yīng)。未水解的蛋白質(zhì)被三氯乙酸沉淀下來，而茚三酮反應(yīng)發(fā)生在上清液。

參考文獻

[1]蛋白酶活性分析試劑盒產(chǎn)品介紹