實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/h2>

1.  學(xué)習(xí)定量維生素C的原理和方法

2.  掌握微量滴定技術(shù)

實(shí)驗(yàn)原理

維生素C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺乏時(shí)會(huì)產(chǎn)生壞血病，因此，又稱為抗壞血酸。它對(duì)物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)具有重要的作用，近年來發(fā)現(xiàn)它還能增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤的抵抗力，并具有對(duì)化學(xué)致癌物的阻斷作用。

維生素C是具有L-系糖構(gòu)型的不飽和多羥基化合物，屬于水溶性維生素。它分布很廣，植物的綠色部分及許多水果（桔類、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很豐富。

維生素C具有很強(qiáng)的還原性，在堿性溶液中加熱并有氧化劑存在時(shí)，維生素C易被氧化而破壞。在中性和微酸性環(huán)境中，維生素C能將染料2，6—二氯酚靛酚還原成無色的還原型的2，6—二氯酚靛酚，同時(shí)將維生素C氧化成脫氫維生素C。氧化型的2，6—二氯酚靛酚在酸性溶液中呈現(xiàn)紅色，在中性或堿性溶液中呈蘭色。當(dāng)用2，6—二氯酚靛酚滴定含有維生素C的酸性溶液時(shí)，在維生素C尚未全被氧化時(shí)，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即被還原成無色。但當(dāng)溶液中的維生素C剛好全部被氧化時(shí)，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即時(shí)溶液呈紅色。所以，當(dāng)溶液由無色變?yōu)槲⒓t色時(shí)即表示溶液中的維生素C剛好全部被氧化，此時(shí)即為滴定終點(diǎn)，從滴定時(shí)2，6—二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以計(jì)算出被檢物質(zhì)中還原型維生素C的含量。

其化學(xué)反應(yīng)式如下：

儀器、試劑

（一）儀器：研缽、天平、燒杯（50ml）、量筒、移液管、錐形瓶（50ml）、微量滴定管、漏斗

（二）材料、試劑

1、新鮮蔬菜或新鮮桔子

2、1%草酸溶液

1g草酸溶于100ml蒸餾水中

3、2%草酸溶液

2g草酸溶于100ml蒸餾水中

4、標(biāo)準(zhǔn)維生素C溶液

準(zhǔn)確稱取20mg純維生素C 粉狀結(jié)晶于1%草酸溶液中，稀釋至100ml，再取其中10ml稀釋至100ml，即得0.02mg/ml的維生素C溶液。在使用前臨時(shí)配制。

5、0.02%2，6—二氯酚靛酚溶液

  溶解50mg2，6—二氯酚靛酚于約200ml含有52mg的NaHCO3的熱水中，冷后稀釋至250ml，過濾，裝于棕色瓶中，放入冰箱中保存。使用時(shí)用維生素C標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)定其濃度。

實(shí)驗(yàn)步驟

一、2，6—二氯酚靛酚溶液的標(biāo)定：

取3ml維生素C標(biāo)準(zhǔn)液及3ml1%草酸溶液于50ml的錐形瓶中，用配制好的2，6—二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至粉紅色出現(xiàn)，并保持15s不褪色，即滴定終點(diǎn)，此時(shí)所用染料的體積相當(dāng)于0.06mg維生素C，由此可求出每ml2，6—二氯酚靛酚溶液相當(dāng)于維生素C的mg數(shù)。

二、樣品制備：

1、稱取新鮮蔬菜或水果（要有大、中、小各部分的代表，洗凈，除去不可食部分，切碎，混勻）約5克，于研缽中，加入等體積(5ml)的2%草酸溶液研磨成漿狀，得勻漿液。

2、將勻漿液移入50ml錐形瓶中，可用1%草酸溶液幫助轉(zhuǎn)移，并稀釋至50ml刻度處。

3、充分搖勻，靜止幾分鐘后過濾至50ml燒杯內(nèi)。（注：50ml勻漿液要過濾完全）。

三、樣品滴定：

用移液管吸取濾液3-8ml于50ml的錐形瓶中，立即用標(biāo)定過的2，6—二氯酚靛酚溶液滴定，直至溶液呈淺粉紅色15s不褪色為止。記錄所用染料的ml數(shù)。為避免其它物質(zhì)的干擾，滴定過程不得超過2min。（注：滴定所用的染料不應(yīng)少于1ml或多于4ml，若滴定結(jié)果不在此范圍，則必須增減樣品量或?qū)⑻崛∫合♂專?/p>

四、計(jì)算：維生素C含量（mg/100g樣品）c=（VT/W）×100

V為滴定樣品所耗用的染料的ml數(shù)

T為1ml染料相當(dāng)于維生素C的mg數(shù)

W為滴定時(shí)所用樣品的g數(shù)

注意事項(xiàng)

1.整個(gè)滴定過程要迅速，防止還原型的維生素C被氧化。滴定過程一般不超過2min。滴定所用的染料不應(yīng)少于1ml或多于4ml，若滴定結(jié)果不在此范圍，則必須增減樣品量或?qū)⑻崛∫合♂專?/p>

2.本實(shí)驗(yàn)必須在酸性條件下進(jìn)行，在此條件下，干擾物反應(yīng)進(jìn)行很慢；

3.提取液中尚含有其它還原性的物質(zhì)，均可與2，6—二氯酚靛酚反應(yīng)，但反應(yīng)速度均較維生素C慢，因而，滴定開始時(shí)，染料要迅速加入，而后盡可能一滴一滴地加入，并要不斷地?fù)u動(dòng)錐形瓶直至呈粉紅色15s不褪色為終點(diǎn)；

4.若提取液中色素很多時(shí)，滴定不易看出顏色變化，需脫色，可用白陶土、30%Zn（AC）2和15%K4Fe（CN）6溶液等，本實(shí)驗(yàn)用30%Zn（AC）2和15%K4Fe（CN）6溶液脫色，若色素不多，可不脫色，直接滴定。

5.在生物組織和組織提取液中，維生素C還能以脫氫維生素C及結(jié)合維生素C的形式存在，它們同樣具有維生素C的生理作用，但不能將2，6—二氯酚靛酚還原脫色.

6. 2%草酸有抑制抗壞血酸酶的作用，而1%的草酸無此作用